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matricola
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Inserito il - 18 giugno 2009 : 15:41:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di matricola Invia a matricola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao raga, mi hanno lasciata sola in lab... devo diluire un siRNA appena arrivato, che e' 10nmol concentrato. poi mi servono 240nM totali per il mio experimento come si fa???

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 18 giugno 2009 : 15:47:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
aspetta...
Citazione:
e' 10nmol concentrato

intendi che sono 10 nanomoli in polvere o che è concentrato 10nM (nano molare)?
Citazione:
poi mi servono 240nM totali per il mio experimento

nel tuo esperimento servono 240nmoli totali o ti serve ad una concentrazione di 240nM (nano molare)?
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matricola
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4 Messaggi

Inserito il - 18 giugno 2009 : 16:05:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di matricola Invia a matricola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
che sono 10nmoli in polvere
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matricola
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4 Messaggi

Inserito il - 18 giugno 2009 : 16:06:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di matricola Invia a matricola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
e mi serve una concentrazione 240nM(nanomolare)
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 18 giugno 2009 : 17:05:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Mi sono dimenticata di farti una domanda, cioè in quanto volume finale devi utilizzare il siRNA?

Comunque a te serve una concentrazione finale 240nM quindi:
240 nmoli/L = 240 pmoli/ml = 0,24 pmoli/ul
quindi per ogni microlitro della suluzione finale in cui metti il siRNA dovrai mettere 0,24 picomoli.

Tu hai 10nmol se le sciogli in 1 ml avrai: 10nmol/ml = 10pmol/ul
10 picomoli/ul poi qua dipende tutto dal volume di reazione finale, se devi mettere il tuo siRNA in 100ul finali allora puoi prendere:
(0,24 pmol/ul)/(10pmol/ul) x 100ul = 2,4ul che è un volume piccolo ma comunque pipettabile.

Se hai un volume finale inferiore dovresti perderne un volume troppo piccolo!
Quindi ti consiglierei da questa soluzione madre di fare una diluizione 1:10 così avrai 1 pmol/ul
a questo punto dovrai prenderne: 0,24/1 = 0,24 ul
attenzione però sono 0,24 ul per ogni ul di soluzione finale!
Quindi se la soluzione finale in cui usi il siRNA è ad es. 100ul dovrai prenderne: 0,24 ul x 100ul = 24ul


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matricola
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4 Messaggi

Inserito il - 18 giugno 2009 : 17:54:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di matricola Invia a matricola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie GFPina!!!!! sei stata chiarissima :)
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