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 actinomicina e tubulina
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biomol
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65 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2009 : 13:21:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biomol Invia a biomol un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao ragazzi,
ho un problema concettuale. sto facendo degli esperimenti di western blotting per capire se l'actinomicina D influenza l'espressione della mia proteina. Il mio capo mi ha detto di fare un controllo con fos o tubulina per capire se l'actinomicina sta funzionando...non capisco perchè?e cosa si aspetta?cioè per westwrn blotting dovrei vedere una diminuizione di tubulina o fos in seguito al trattamento con actinomicina?
aiutatemi per favore sto impazzendo..

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8380 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2009 : 14:34:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
No semplicemente intende un controllo (housekeeping) per calibrare la quantità di proteina.
Tubulina non dovrebbe essere affetta dal trattamento e quindi dovresti avere una banda uguale in tutti i campioni mentre della proteina che stai studiando se funziona il trattamento dovresti avere una diminuzione. In questo modo puoi dire che la quantità di proteine totali seminate è la stessa, ma la tua proteina è diminuita.
Se hai una diminuzione anche della banda di tubulina allora può essere che hai caricato meno proteine in quel campione e quindi la diminuzione che vedi della tua proteina non è reale.


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