Quanto è utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
Strawberry
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 23 giugno 2009 : 16:41:29
|
Ciao a tutti,
abbandonata l'idea di un elettroporatore,avevo bisogno di qualche dritta su come poter effettuare una trasfezione mediante liposomi su cellule Huvec.
Ero orientata sull'uso di lipofectamine RNA i Max , ne esistono di migliori? E' in vendita un kit, con dentro tutto l'occorrente?
E poi una cosa mooolto importante che non sono riuscita a capire, riguarda l'efficienza, mi spiego meglio, se un kit mi da un'efficienza dell 80 % come faccio a vedere che il 20 % non è stato trasfettato?
GRAZIE a tutti,
S.
|
|
|
|
|
Flashtgm
Nuovo Arrivato
17 Messaggi |
Inserito il - 23 giugno 2009 : 17:38:23
|
Se vuoi trasfettare siRNA, posso consigliarti il siRNA starter kit della Ambion. Si basa su un agente trasfettante lipidico, siPORT NeoFX. Non è troppo costoso e il protocollo è abbastanza semplice.
C'è da dire che è l'unico kit per trasfezione con cui ho mai avuto a che fare! |
 |
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 23 giugno 2009 : 18:16:46
|
Mai lavorato con HUVEC, mi sembra solo che non siano tra le più facili da trasfettare.
Però siccome non sono cellule sconosciute in genere nelle tabelle di efficienza di trasformazione dei vari kit dovrebbero essere riportate, fai una ricerca e guarda quale sembra il migliore.
Tieni conto che cellule diverse si trasfettano meglio con reagenti diversi, non esiste il reagente "migliore" in assoluto.
Questo da una parte è pure un vantaggio nel senso che c'è molta concorrenza e le ditte sono in genere propense a farti provare i loro reagenti, quindi la cosa migliore da fare è contattare i vari rappresentanti e chiedere consiglio e farti dare i prodotti da testare! 
Poi scegli tu con quale ti trovi meglio.
Riguardo l'efficienza di trasformazione:
Citazione:
E poi una cosa mooolto importante che non sono riuscita a capire, riguarda l'efficienza, mi spiego meglio, se un kit mi da un'efficienza dell 80 % come faccio a vedere che il 20 % non è stato trasfettato?
Trasfetti le cellule con un "qualcosa" (dipende dai vari kit) che ti dà fluorescenza.
Vedi le cellule prima in campo chiaro e vedi quante sono, poi le vedi in fluorescenza e "conti" quante emettono fluorescenza, dal rapporto: cellule fluorescenti/cellule totali
calcoli l'efficienza di trasfezione.
Ovviamente i genere è un calcolo approssimativo, non conti fisicamente tutte le cellule. |
|
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto è utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
Trasfezioni mediante liposomi!
Didattica
