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pepy
Nuovo Arrivato



15 Messaggi

Inserito il - 01 luglio 2009 : 13:30:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di pepy Invia a pepy un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao!qualcuno sà risp a queste domande???
Dopo aver clonato e sequenziato il cDNA della proteina Y, si vuole stabilire in quali tessuti viene espressa e le quantità relative.
-quali metodologie conosce per ottenere queste informazioni?
-disegni per punti la stategia che intende adottare?
-descriva il principio sul quale si fonda la metodologia che intende adottare?

mikymiky
Nuovo Arrivato


Prov.: Brescia
Città: lonato


45 Messaggi

Inserito il - 01 luglio 2009 : 18:04:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mikymiky  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di mikymiky Invia a mikymiky un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
mhm.. al momento a me verrebbe in mente di creare un proteina chimera, facendo una fusione con un gene reporer, e vedere dove viene espressa.

oppure, mi par che la cosa migliore sia fare un southern blot usando come sonda il cDNA. A partire da un libreria di cDNA, per i diversi tessuti, vedi in quale hai ibridazione sonda.target
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pasetz
Nuovo Arrivato



2 Messaggi

Inserito il - 01 luglio 2009 : 18:33:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di pasetz Invia a pasetz un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, io proverei anche con l'immunofluorescenza è ottima per evidenziare la presenza delle proteine nei tessuti o organelli. L'unica cosa è che poi ti servirebbe un microscopio confocale.
Citazione:
Messaggio inserito da pepy

ciao!qualcuno sà risp a queste domande???
Dopo aver clonato e sequenziato il cDNA della proteina Y, si vuole stabilire in quali tessuti viene espressa e le quantità relative.
-quali metodologie conosce per ottenere queste informazioni?
-disegni per punti la stategia che intende adottare?
-descriva il principio sul quale si fonda la metodologia che intende adottare?

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pasetz
Nuovo Arrivato



2 Messaggi

Inserito il - 01 luglio 2009 : 18:35:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di pasetz Invia a pasetz un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao,ho visto che sei di lonato...io poco lontano sono di bedizzole dove studi biologia molecolare? Io l'ho fatta a Pd
Citazione:
Messaggio inserito da mikymiky

mhm.. al momento a me verrebbe in mente di creare un proteina chimera, facendo una fusione con un gene reporer, e vedere dove viene espressa.

oppure, mi par che la cosa migliore sia fare un southern blot usando come sonda il cDNA. A partire da un libreria di cDNA, per i diversi tessuti, vedi in quale hai ibridazione sonda.target

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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2009 : 09:01:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Ciao, io proverei anche con l'immunofluorescenza è ottima per evidenziare la presenza delle proteine nei tessuti o organelli. L'unica cosa è che poi ti servirebbe un microscopio confocale.

Più che il confocale (che alla fine si trova facilmente) credo che il problema maggiore sarebbe avere un anticorpo per quella proteina.

Ad ogni modo SE uno ha l'anticorpo l'immunoistochimica è una buona tecnica (anche se ci sono vari esempi nella letteratura che mostrano quanto bisogna essere cauti con l'interpretarne i risultati).
Ovviamente puoi anche fare Western blot da vari tessuti/frazioni cellulari.

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Schuldiner86
Utente Junior

Biotech

Prov.: Viterbo
Città: Bologna


581 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2009 : 09:26:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Schuldiner86  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Schuldiner86  Invia a Schuldiner86 un messaggio Yahoo! Invia a Schuldiner86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se non ha l'anticorpo potrebbe fare una proteina di fusione con un tag, che se non è troppo lungo si può inserire anche con un primer di PCR. Poi potrebbe usare un anticorpo anti-tag.



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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2009 : 10:08:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sì, ma la domanda dice: "in quali tessuti è espressa", quindi dovresti fare un animale transgenico per la proteina con il tag, il che ti prenderebbe un paio di anni per arrivare a nessuna conclusione utile visto che non sapresti se il tag influenza la localizzazione della proteina!

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Schuldiner86
Utente Junior

Biotech

Prov.: Viterbo
Città: Bologna


581 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2009 : 11:16:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Schuldiner86  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Schuldiner86  Invia a Schuldiner86 un messaggio Yahoo! Invia a Schuldiner86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grosso abbaglio...grossissimo abbaglio!



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mikymiky
Nuovo Arrivato


Prov.: Brescia
Città: lonato


45 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2009 : 22:19:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mikymiky  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di mikymiky Invia a mikymiky un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
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Messaggio inserito da pasetz

Ciao,ho visto che sei di lonato...io poco lontano sono di bedizzole dove studi biologia molecolare? Io l'ho fatta a Pd
Citazione:
Messaggio inserito da mikymiky

mhm.. al momento a me verrebbe in mente di creare un proteina chimera, facendo una fusione con un gene reporer, e vedere dove viene espressa.

oppure, mi par che la cosa migliore sia fare un southern blot usando come sonda il cDNA. A partire da un libreria di cDNA, per i diversi tessuti, vedi in quale hai ibridazione sonda.target





ti ho risp nei nei mess privati!!
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