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Magò
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
 Inserito il - 14 luglio 2009 : 16:48:15
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ciao a tutti,sto iniziando a fare dei western in particolare il laemmli e il primo problema è come devo preparare il campione(sto lavorando con cell HeLa),in particolare:
1)a me interessa una proteina citoplasmatica di 130 KDa,ma prima voglio vedere se almeno riesco a vedere le proteine tot sul gel(quindi vorrei fare una coloraz con coomassie)
2)come inibitore delle proteasi sto usando PMSF,ma che concentrazione finale devo avere nel mio campione?
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 14 luglio 2009 : 18:08:09
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non ho capito quale sia il problema del punto 1, potresti spiegarti meglio? riguardo al punto 2, al di là della concentrazione del PMSF (che io personalmente uso 2mM) non penso che basti da solo come inibitore delle proteasi. in genere si usa un cocktail di inibitori che comprende, tra gli altri, pepstatina, leupeptina, aprotinina, ortovanadato, ognuno con una funzione specifica per una determinata classe di proteasi. sono ottimi i cocktail in pasticche (li vende roche) e ti basta sciogliere una pasticca e sei a posto!
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
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