Tecnica per rilevare l'attività di una proteina

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star87
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 24 luglio 2009 : 15:27:49

Ciao a tutti! Volevo chiedere quali tecniche posso usare per stimare l'attività di un enzima che taglia una proteina? A parte munire il substrato di molecole fluorescenti che emettano dopo il taglio.
Grazie ciao

iago
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
Città: Roma

11 Messaggi

Inserito il - 29 luglio 2009 : 22:04:38

anziché andare a marcare i due frammenti proteici a monte (che mi pare una scelta abbastanza "faticosa" da attuare) potresti fare un elettroforesi dei prodotti di clivaggio e, successivamente, un blot con anticorpi marcati in fluorescenza diretti su ciascuno dei due frammenti.

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 29 luglio 2009 : 22:26:41

Anche HPLC o simili.

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agosto
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 07 agosto 2009 : 17:10:32

puoi anche fare la classica SDS page. Altrimenti ci sono il commercio dei kit che si basano su una reazione colorimetrica che poi leggi allo spettrofotometro come variazione di OD rispetto al bianco.
Un metodo un pò grezzo ma che ti da una prima stima è usare un kit che trovi in commercio fatto da una soluzione marrone che a contatto con la proteina tene al blu e diventa blu elettrico quando la concentrazione di proteina è a plateau. Prima devi però fare una curva di taratura con BSA. Non so se è consentito dal regolamento di molecularlab fare pubblicità di prodotti quindi non ti scrivo il nome ma sappi che lo trovi facilmente scrivendo protein assay in un qualsiasi motore di ricerca.
Io in tesi ho usato la spettrometria di massa MALDI-TOF che è una bomba ma non so se dove ti trovi c'è la possibilità di avere quasto tipo di analisi.
Ciao