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sspina17
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
 Inserito il - 05 settembre 2009 : 11:04:23
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ciao a tutti,
mi sono appena registrata e questo forun è davvero utilissimo!
quindi ne approfitto al volo....
nel mio lab dobbiamo estrarre DNA da sangue intero congelato ormai da moltissimo tempo. Abbiamo circa 5 ml di ciascun campione e vogliamo utilizzare tutto il sangue che abbiamo per l'estrazione. Non abbiamo però ancora deciso quale sia la metodica più adatta per avere la migliore qualità di DNA possibile da conservare poi a lungo. Mi potreste dare qualche suggerimento? Kit vari, protocolli ecc
grazie mille
ciao a tutti
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sspina17
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
 Inserito il - 09 settembre 2009 : 17:24:39
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ciao,
ma allora nessuno mi aiuta??? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 09 settembre 2009 : 18:46:51
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Io l'ho fatto parecchie volte, anche se un po' di tempo fa.
Prima utilizzavo un metodo manuale che era essenzialmente basato su questo kit: DNA Isolation Kit for Mammalian Blood (Boheringher-Roche)
ma ci facevamo le soluzioni a mano, dovrebbe essere riportato anche sul Maniatis, ma in questo momento non ci giurerei.
L'unico problema è che devi avere una centrifuga che arrivi ad elevate velocità per quantità abbastanza grosse (almeno 10ml), l'ho fatto in un laboratorio dove non l'avevamo e dovevo dividere il tutto in provette da 2ml, per poi riunirlo... uno sbattimento, ma l'estrazione veniva bene.
Poi l'ultimo che avevo utilizzato è stato questo: FlexiGene DNA Kit (Qiagen)
Il problema maggiore su sangue congelato, sopratutto se da molto tempo è che ti viene fuori un DNA più sporco, comunque io non ho mai avuto particolari problemi e ci ho sempre fatto tranquillamente le PCR, solo in pochissimi casi il DNA non era utilizzabile.
Ti sconsiglio comunque di utilizzare kit di estrazione su colonnina perché la resa è molto bassa.
Se hai altre domande fai pure.
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sspina17
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 10 settembre 2009 : 16:16:05
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anche noi abbiamo già usato il kit FlexiGene DNA Kit (Qiagen)e ci siamo trovati bene.
ciao e grazie |
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