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MariangelaB
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Inserito il - 09 settembre 2009 : 17:30:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di MariangelaB Invia a MariangelaB un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti!

Da qualche tempo sto avendo problemi con la PCR...

In seguito ad elettroforesi su gel d'agarosio al 3% (125 Volts per circa 1h)di ampliconi di 128 bp il segnale luminescente rimane fisso nel pozzetto!
Questo comportamento, però, è stato riscontrato solo per questi amplificati(che tra l'altro in precedenza non hanno mai dato problemi) mentre con altri ampliconi(amplificati utilizzando gli stessi reagenti, fatta eccezione dei primers, e le stesse condizioni dei primi) il problema non sussiste, il che indica che non si tratta di errori nella corsa elettroforetica.
Ipotizzando una degradazione dei primers in questione, ho riprovato l'amplificazione con una stock di primers nuova, ma non ho ottenuto nessun miglioramento!

Ci tengo a precisare che questa situazione è nata improvvisamente, e che in precedenza non avevo avuto mai questo tipo di problema usando gli stessi reagenti e lo stesso DNA genomico!

Vi allego la foto del gel in questione!

Grazie mille per la collaborazione..
Buon lavoro a tutti!

Immagine:

283,34 KB
EDIT: immagine ridotta di dimensioni - chick80
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