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fpotpot
Utente
Cittā: middleofnowhere
1056 Messaggi |
 Inserito il - 11 maggio 2006 : 17:09:10
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ciao a tutti!
ho un articolo da leggere e seguiro' una talk su LATE-PCR.L'articolo e' di Lawrence J.Wangh del 2003.Premesso che io ho solo fatto la pcr normale nella mia vita...qui si dice che questa tecnica e' un metodo avanzato di PCR asimmetrica,ma migliore di quest'ultima ovviamente.
E che la PCR asimmetrica nasce per ovviare ai problemi della convenzionale real-time (che a questo punto sara' simmetrica??) perche' in quest'ultima le reazioni si rallentano e fanno "plateau stocasticamente"perche' il reannealing degli templates strands gradualmente supera il binding di primer e probe a questi stessi.
A questo punto mi sorge la domanda: cosa sono la PCR simmetrica e asimmetrica???vi prego rispondete numerosi!!!!
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Cittā: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2006 : 17:15:43
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La PCR asimmetrica una pcr in cui il prodotto predominante un singolo filamento di DNA, in seguito all'utilizzo di concentrazioni di primer sbilanciate.
La reazione avviene come una PCR standard ma con un grande eccesso del primer per il filamento di ssDNA scelto rispetto alla conc. del primer per l'altro filamento. L'amplificazione per + lenta (segue un andamento aritmetico) e quindi richiede + cicli del solito.
Ha applicazione ad esempio per le reazioni di sequencing dove basta avere il filamento singolo, oppure per successive rezioni di PCR (tipo overlapping) dove il ssDNA usato come mega primer.
Avevo risposto cos ad un latro 3d sulla pcr... sinceramente non so se stiamo parlando dello stesso tipo di reazione, tanto + che non ho mai fatto quantitative... |
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fpotpot
Utente
Cittā: middleofnowhere
1056 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2006 : 17:22:28
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beh,intanto grazie di risposta repentina!
q eusto punto domanda scema:la pcr asimmetrica e' una real time pcr? |
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fpotpot
Utente
Cittā: middleofnowhere
1056 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2006 : 17:26:57
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| intendi PCR standard come la pcr tipica con la provettina in mano o quella incasinata con real time (che nn ho mai fatto)? |
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fpotpot
Utente
Cittā: middleofnowhere
1056 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2006 : 17:33:31
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| oh,si mi sa che intendi quantitativa cioe' real time,vero? |
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chick80
Moderatore
Cittā: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2006 : 22:50:40
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La PCR asimmetrica e' una PCR normale (end-point) e non realtime.
Citazione:
intendi PCR standard come la pcr tipica con la provettina in mano o quella incasinata con real time (che nn ho mai fatto)?
Anche nella realtime tieni la provettina in mano! 
Il procedimento e' esattamente lo stesso di una PCR normale. |
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Cittā: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2006 : 23:01:10
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si per quantitativa intendo "real time", evito di usare perchè poi mi confondo con la rtPCR  |
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fpotpot
Utente
Cittā: middleofnowhere
1056 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2006 : 23:39:52
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| ok..grazie a tutti e due! |
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PCR simmetrica e asimmetrica
Didattica
