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Autore

Discussione

tambua
Nuovo Arrivato

50 Messaggi

Inserito il - 14 ottobre 2009 : 11:40:13

Piccola domanda:

Dopo una PCR supponendo di voler purificare il prodotto di amplificazione da contaminanti di vario tipo (prodotti aspecifici, incompleti) mediante gel-elettroforesi per una successiva ligazione in un vettore, come si pu� procedere?
Il buffer di partenza non deve essere sostituito con uno compatibile con la corsa e poi successivamente con la ligazione?

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 14 ottobre 2009 : 12:18:29

Non ho capito benissimo la tua domanda.
Comunque il genere quello che puoi fare � seminare il prodotto di PCR su un gel e dopo l'elettroforesi excidere dal gel la banda contenente il tuo amplificato, purificarlo e poi procedere alla ligazione.

Non mi � chiaro il tuo discorso sui buffer comunque ovviamente in ogni passaggio utilizzi i buffer appropriati, ma non � che li sostituisci: per seminare il prodotto di PCR gli aggiungi il sample buffer che conterr� glicerolo (o saccarosio) per far precipitare il campione nel pozzetto e uno o pi� coloranti per seguire la corsa.
Poi una volta estratto il frammento dal gel, quando devi fare la ligazione userai il buffer per la ligazione.

tambua
Nuovo Arrivato

50 Messaggi

Inserito il - 14 ottobre 2009 : 13:16:01

Sono stato di una imprecisione unica nel formularti la domanda, comunque la risposta che mi hai fornito era esattamente quella che desideravo.

A buon rendere green fluorescent Pina

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 14 ottobre 2009 : 14:38:59

Ok bene!

Citazione:
A buon rendere green fluorescent Pina

Oh mi fa piacere che ognitanto ci sia qualcuno che capisce il mio nick!