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Alita
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
 Inserito il - 24 maggio 2006 : 16:25:33
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Ciao a tutti! qualcuno mi può spiegare come funziona il Dna microarray? Il concetto di base e le tecniche.Aiuto ...
Non ci capisco niente,ma devo conoscere questa nuova tecnica perchè oltre all'onorevole fine di farmi passare un esame, ne riconosco l'importanza..Credo che una biotecnologa deve sapere queste tecniche .
Grazie mille!!
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
 Inserito il - 24 maggio 2006 : 17:42:44
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Ciao!
Beh per dirla in poche parole i microarray servono per confrontare la diversa espressione di geni in due diverse popolazioni: ad esempio un campione di controllo e uno con un determinato trattamento (ad es. farmaco).
Si estrae l'RNA dai due campioni, si retrotrascrive formando il cDNA. Il cDNA viene marcato durante o dopo la sintesi con sostanze fluorescenti (diverse nei due campioni) o con isotopi radioattivi. Poi il cDNA viene messo su un vetrino o una membrana dove sono "spottate" (cioè attaccate ogniuna una singola zona "spot") delle sonde per i vari geni. Se è presente il cDNA ad es. del gene A si legherà alla sua sonda complementare sul supporto e così via... alla fine ottengo un pattern (spot positivi o negativi) e so quale gene è espresso nel mio campione. Dal confronto dei due campioni vedo se un gene è maggiormente o minormente espresso in due diverse condizioni.
Ovviamente non ho solo positività o negatività, ma gli spot sono anche di diverse intensità in base al livello di espressione, più è intenso più è espresso il gene.
Beh questo era solo un assaggio per darti un'idea, ti consiglio di dare un'occhiata a questi siti, che ti spiegano più dettagliatamente e... con le immagini.
Il terzo sito è una animazione simpatica che ti fa vedere sperimentalmente come si fa.
http://www.ioideo.it/articolo.asp?ID=758&IDmagazine=2004002&IDLanguage=ITA
http://www.biogate.it/microarrays/microarrays.html
http://www.bio.davidson.edu/Courses/genomics/chip/chip.html
Spero di esserti stata utile, se hai domande riscrivi e in bocca al lupo per l'esame.
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 24 maggio 2006 : 17:56:11
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ops scusa, 
mi sono accorta di un errore, in realtà quelli su membrana sono i MACROarray, i microarray sono quelli su vetrino! |
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Alita
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 18 giugno 2006 : 20:10:16
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Grazie mille per la detagliata risposta, mi è stata molto utile!! Ho cercato anche su altri libri ma ora mi è sicuramente più chiara la tecnica!!
Si basa sullo stesso concetto il chip on chip? per valutare l'attività di un promotore...
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 22 giugno 2006 : 13:15:15
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Ciao Alita,
ho visto solo oggi la tua risposta.
Citazione:
Si basa sullo stesso concetto il chip on chip? per valutare l'attività di un promotore...
Il ChIP on chip (si scrive così!) dove ChIP sta per Chromatin ImmunoPrecipitation è in sostanza l'insieme di due tecniche:
1) L'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) in cui utilizzando un anticorpo specifico per una proteina che si lega al DNA (promotore) precipito la proteina e il DNA legato, poi degrado il DNA "nudo" (cioè non legato alla proteina) e stacco la proteina legata, così mi rimane solo il frammento di DNA che posso analizzare mediante PCR.
2) la seconda tecnica è appunto il microarray (chip) in cui metto sul "chip" quello che ho ottenuto dalla immunoprecipitazione "ChIP".
Questa è un'immagine schematica della tecnica:
Immagine:
90,24 KB
Poi c'è anche un sito specifico a cui puoi dare un'occhiata: http://www.chiponchip.org/index.html
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Alita
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 20 luglio 2006 : 18:00:03
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| Ciao!ho letto solo ora il messaggio!grazie mille!Spiegazione chiarissima,molto più che a lezione!! |
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byrjun84
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 16 agosto 2009 : 19:23:21
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Ciao a tutti, vorrei chiedervi una delucidazione :
perchè con i microarray spotted è possibile effettuare delle ibridazioni contemporaneamente e con l'affymatrix no?
grazie mille in anticipo |
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microarrays
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