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darkene
Utente Junior

occhi


291 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2009 : 12:08:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di darkene Invia a darkene un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao ragazzi, ho un problema che non riesco a risolvere.
sto clonando un gene in un vettore adenovirale (pAAV). la strategia Ŕ questa: il mio gene Ŕ in un vettore pcDNA3.1. lo taglio con due enzimi di restrizione (HindIII-NotI). stessi tagli sono effettuati sul vettore virale. a questo punto corro tutto su gel e vado ad estrarre le bande d'interesse con i kit della quiagen (provato sia colonnine che resina).
il problema Ŕ che dopo l'eluizione, dal vettore (di circa 5kb) viene fuori una banda aggiuntiva di circa 2 kb che prima dell'eluizione non esisteva. all'inizio pensavo a contaminazioni o a problemi di interferenza con l'agarosio, ma ho cambiato tutto: agarosio, acqua, tamponi, kit di estrazione da gel, ho rifatto la maxi del vettore, ma niente. Ŕ mai capitata una cosa del genere a qualcuno? avete un'idea di cosa possa essere capitato? possibili soluzioni?
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