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tambua
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50 Messaggi |
 Inserito il - 08 novembre 2009 : 17:57:44
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Salve ragazzi,
volevo porvi questo quesito.
Si supponga di avere un sistema di traduzione in vitro (un kit basato ad esempio su un lisato di reticolociti di rabbit) contenente un opportuno marcatore proteico (metionina S35). Ora, dopo corsa elettroforetica del prodotto di traduzione e successiva autoradiografia, si visualizzeranno un certo numero di bande corrispondenti alle diverse proteine sintetizzate a partire daglimRNA di partenza.
La ma domanda a questo punto è:
Come si può sfruttare un sistema di questo tipo, senza andare sul complesso, per risalire indirettamente da un prodotto proteico (verso cui si abbiano degli anticorpi) al gene che lo codifica?
Se non fossi stato chiaro:
Ho degli mRNA, li faccio tradurre ed ottengo le proteine corrispondenti. Come risalgo da un prodotto proteico che posso evidenziare grazie ad un anticorpo al gene che lo codifica?
Si accettano suggerimenti 
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 08 novembre 2009 : 19:38:12
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Non ho capito se intendi dal punto di vista teorico cioè risalire a quale sia le sequenza del gene, o pratico, vuoi proprio isolare il gene.
Inoltre della proteina che ottieni (prendiamone in considerazione una) e che identifichi con l'anticorpo sai la sequenza aminoacidica? |
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tambua
Nuovo Arrivato
50 Messaggi |
Inserito il - 09 novembre 2009 : 14:26:58
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E' una domanda tutta teorica che mi è venuta in testa studiando la in vitro transcription/translation.
Vorrei capire se, identificata da un pool di proteine fatte esprimere in vitro, una determinata proteina, c'è un sistema con cui risalire all'mRNA ad essa relativa e quindi poi al gene.
Onestamente pensavo anche io al sequenziare la proteina e da qui farmi una sonda oligonucleotidica (tralasciando degenerazione di codice genetico, bias e quant'altro)con cui fare un southern, ma non so se onestamente è l'1ca strada o sto sbagliando qualcosa.
Grazie Gfpina che ancora stai dietro le mie elucubrazioni mentali |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 09 novembre 2009 : 22:30:02
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Beh dipende molto da che informazioni hai, poi puoi utilizzare tutte le tecniche che conosci e un po' di fantasia!
Potrebbe anche essere una classica domanda da esame.
Giusto per mettere giù un paio di idee:
se hai un anticorpo contro la proteina "presumo" che tu qualcosa debba sapere di quella proteina, quindi se ad es. sai la sequenza un'idea è quella che suggerisci tu.
Poi magari la sequenza del gene non è conosciuta nella tua specie in esame, ma lo è in altre specie e quindi puoi fare una ricerca per omologia col gene di un'altra specie.
Mi sembrava ci fossero altre discussioni su questo argomento, ma sono stanca e non le trovo, ho trovato solo questa:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=11567
Beh in questo momento non mi vengono molte idee, ma se cerchi un po' sono sicura che troverai qualcosa nelle altre discussioni, poi se qualcuno volesse intervenire... |
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tambua
Nuovo Arrivato
50 Messaggi |
Inserito il - 10 novembre 2009 : 15:57:26
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 Meno male che non sono Prof., altrimenti ero odiatissimo dagli studenti! In realtà è una domanda che mi sono posto da solo in previsione di un esame che sto preparando (tecniche biomolecolari).
 e Grazie mile Cherry Pina |
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Dalle proteine al gene
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