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galga
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1 Messaggi

Inserito il - 26 novembre 2009 : 16:30:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di galga Invia a galga un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Buonasera a tutti,
avrei da porvi un quesito. Ho effettuato un clonaggio partendo dal mio prodotto di PCR (1200bp)usando primers al 5' con polyT, sito XbaI e sequenza complementare, mentre al 3' sequenza complementare, stop codon (TAA), sito XbaI. Dopo digestione enzimatica con XbaI, l'ho legato al mio vettore digerito a sua volta con XbaI ed estratto da gel. Risultato? l'inserto si è legato senza problemi di direzionalità ma....il sito XbaI al 3' si è modificato. Infatti digerendo il costrutto con XbaI abbiamo linearizzazione, ma non formazione di un inserto a 1200bp. Il risultato è stato confermato da sequenza. Domanda: può essere successo che non mettendo al primer 3' una sequenza di polyT l'enzima di restrizione XbaI ha tagliato in modo errato??
Grazie
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