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 vettore policistronico?????
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nomis
Nuovo Arrivato

0613_da_Fil23
Città: roma


16 Messaggi

Inserito il - 14 dicembre 2009 : 18:12:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di nomis Invia a nomis un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
sapete indicarmi un vettore plasmidico o retrovirale che abbia due promotori (tipo CMV). devo clonare 2 premiR in un unico vettore che abbia quindi 2 promotori esiste in commercio???
grazieeeeeeeeeeee

d.goldy
Nuovo Arrivato



39 Messaggi

Inserito il - 14 dicembre 2009 : 21:16:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di d.goldy Invia a d.goldy un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
perchè non puoi clonarli in 2 vettori diversi?
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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 14 dicembre 2009 : 23:18:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per l'espressione policistronica in eucarioti
ci sono tre sistemi:
1) Sequenze IRES
2) Sequenze autoclivanti 2A
3) Promotori bidirezionali

Se devi clonare pre-miR, prova a dare una sbirciata qua.


Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2009 : 00:27:49  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
N.B. un vettore con due promotori NON è un vettore
policistronico, perchè genererà due trascritti
indipendenti. Questo perchè i promotori devono
essere diversi (guai se a mettere due promotori
identici nello stesso vettore...).

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(F.W. Nietzsche)

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nomis
Nuovo Arrivato

0613_da_Fil23

Città: roma


16 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2009 : 16:35:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di nomis Invia a nomis un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
SI HAI RAGIONE INFATTI IL MIO "POLICISTRONICO" ERA PER FAR CAPIRE IL CONCETTO.. perchè mi dici guai a mettere due promotori identici???
io ho visto dei paper che mostravano plasmidi retrovirali sia con promotori bidirezionali che con due promotori uguali... ma non in commercio... mi puoi spiegare perchè non si può????

grazie... soprattutto per il link!!!;)
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Gipo
Nuovo Arrivato



1 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2011 : 12:53:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gipo Invia a Gipo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao, per caso mi sto ponendo un problema su una serie di costrutti con 3 promotori, due dei quali identici (CaMV35S in cell vegetali). mi ha colpito l'anatema di Dionysos. Come mai: guai se a mettere due promotori identici nello stesso vettore...
per il silencing?
lavoro in celluel vegetali, conosco il problema ma non saprei fare alcun riferimento a riguardo, puoi dirmi quello che sai in proposito?
grazie
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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2011 : 13:28:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ops, mi sono reso conto solo ora di non aver mai risposto a questo quesito.

La ragione per cui evitare di utilizzare promotori identici nello
stesso vettore è la stessa per cui bisogna evitare di utilizzare
regioni a reciproca omologia all'interno di un costrutto: eliminare
il rischio di ricombinazione omologa, che potrebbe portare alla
excisione del frammento compreso tra due regioni omologhe (o peggio:
identiche). E' buona norma evitarlo, ma non tutti se ne fanno un problema.
Fino a che non ci si imbatte in cloni ricombinati...

I primi vettori retrovirali erano fatti così, e non funzionavano una mazza, infatti.


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