Forum

Nome Utente:
Password:
Riconoscimi automaticamente
 Tutti i Forum
 Laboratorio
 Biologia Molecolare
 clonaggio del promotore
 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
I seguenti utenti stanno leggendo questo Forum Qui c'č:

Aggiungi Tag Aggiungi i tag

Quanto č utile/interessante questa discussione:

Autore Discussione  

emi24
Nuovo Arrivato



40 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2009 : 00:42:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di emi24 Invia a emi24 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti !
vi chiedo un confronto...
se nel promotore di un gene sono stati individuati 3 SNPs diversi presenti nei soggetti in studio o singolarmente o a due a due e inizialmente si procede amplificando e clonando in opportuni vettori regioni singole contenenti ciascuna un polimorfismo, perche' quando si vuole valutare l'influenza di un polimorfismo sull'altro contemporaneamente conviene clonare tutto il promotore e magari non amplificare una regione ( che verra' sucessivamente clonata ) contenente entrambi i polimorfismi?

vi ringrazio.

Dionysos
Moderatore

D

Cittā: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2009 : 10:24:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non so se ho capito l'impostazione (sintattica!) della domanda
ma credo che prima di tutto bisogni validare un saggio di attivitā
luciferasica (o di altro reporter) a partire da un vettore in cui
sia stato clonato tutto il promotore.

Dopodichč puoi provare a inserire gli SNP, magari per mutagenesi,
e quindi valutare i cambiamenti nella sua attivitā (se č questo
ciō che ti interessa!)




Volere libera : questa é la vera dottrina della volontā e della libertā
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


Torna all'inizio della Pagina

emi24
Nuovo Arrivato



40 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2009 : 13:15:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di emi24 Invia a emi24 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
per prima cosa...grazie per la risposta
poi...quanto alla domanda...si e' partiti conducendo saggi luciferasi per regioni del promotore contenenti singoli polimorfismi che pertanto sono state prima amplificate e poi clonate in un vettore reporter.

sucessivamente si č parlato di estendere lo studio all'intero promotore sempre mediante saggi luciferasi.

In base a quello che mi dici, deduco che forse andava valutata prima l'espressione del reporter con saggi luciferasi del promotore wt e sucessivamnete mutagenizzare per gli SNPs trovati e studiare l'asressione della luciferasi considerando o un solo polimorfismo, o 2 polimorfismi contemporaneamente o tutti i 3 polimorfismi contemporaneamente. Mi sembra di capire che forse anche lo studio sui polimorfismi andava fatto sull'intero promotore e non su singole regioni del promotore che contenevano il polimorfismo.

Mi chiedo, qundi, qual'e' il vantaggio di clonare un intero promotore con un polimorfismo rispetto alla possibilitā di clonare una regione del promotore con lo stesso polimorfismo se gia' di per se il clonaggio nn e' facile e sicuramente con l'intero promotore sara' piu' difficile?

A tuo parere...dato che disponevamo del DNA di questi soggetti con i polimorfismi singoli o in associazione ( ad es. sia con il polimorfismo uno che con il polimorfismo due) potevamo evitare la mutagenizzazione e procedere clonando direttamente o le singole regioni contenenti il polimorfismo
( come č stato fatto) o l'intero promotore contenete o un singolo polimorfismo o piu' di uno ( cosa che non č stata fatta) ?

ti ringrazio..

Torna all'inizio della Pagina
  Discussione  

Quanto č utile/interessante questa discussione:

 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
Vai a:
MolecularLab.it © 2003-18 MolecularLab.it Torna all'inizio della Pagina