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elisa23
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
 Inserito il - 15 dicembre 2009 : 08:49:23
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Ciao a tutti! Sto cercando disperatamente di allestire una coltura primaria di cardiomiociti di topo, seguendo un protocollo opportunamente adattato da alcuni lavori trovati su pubmed.... la dissociazione tecnicamente è venuta bene, ma il problema è l'inquinamento... Ovviamente (per quanto ho potuto) ho cercato di lavorare in sterilità ma l'inquinamento sembra proprio inevitabile.....
C'è un modo per limitarlo? Ogni consiglio è bene accetto! Grazie in anticipo!
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d.goldy
Nuovo Arrivato
39 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2009 : 01:27:48
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ciao!
intanto in bocca al lupo! che impresa!
Io ho provato a lavorare con il cuore di ratto, e ci ho messo un secolo prima di avere una dissociazione decente... ma probabilente io sono un caso clinico!
Nel mio lab fanno quotidianamente dissociazioni da cuore di topo, se vuoi domani chiedo. Per quanto li devi far crescere? noi siamo arrivati a 1 settimana, ma credo che aggiungessimo antibiotico... voi come fate?
Ancora in bocca al lupo |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2009 : 01:42:50
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Io facevo primarie di cervello e le tenevo in terreno con Pen/Strep.
Per altro valgono le normali regole di lavoro in sterilità, anche se ovviamente parti da tessuto non sterile. |
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elisa23
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2009 : 09:18:10
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Intanto grazie per le risposte.... ieri ho fatto un altra dissociazione aumentando di molto il numero dei lavaggi prima di piastrarle, ho appena dato un occhiata alle cellule e (per ora) non sono inquinate.... è già un grande passo avanti visto che prima si inquinavano dopo poche ore!  Mipiacerebbe però mantenerle per almeno una settimana se possibile...
per d.goldy:
noi abbiamo sostanzialmente seguito il protocollo descritto nel lavoro di Sreejit et al. del 2008..... voi invece?
Grazie e buon lavoro!
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mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato
116 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2009 : 17:24:12
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| io lavoro molto su colture primarie cardiomiociti di ratto e non abbiamo inquinanti. oltre a tutti i passaggi in sterilita espiantiamo i cuori sotto cappa con tutti i ferri (pinze e forbici) sterili. lo fai anche te? inoltre mettiamo anche gli antibiotici nel terreno |
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elisa23
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2009 : 18:09:01
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Ciao! Sì, anche noi espiantiamo il cuore sotto cappa e sterilizziamo tutti gli strumenti..... in ogni caso, come ho già scritto prima, provando ad aumentare il numero di lavaggi una volta ottenuta la dissociazione (e lavando un pò più accuratamente il preparato anche subito dopo l'espianto) sono riuscita ad ottenere delle fiasche "pulite".... per ora ovviamente.... vedremo nei prossimi giorni... Tu per quanto riesci a mantenerli in coltura?
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mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato
116 Messaggi |
Inserito il - 17 dicembre 2009 : 08:37:41
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| 8 giorni. ma solo perche dopo le processiamo per gli esperimenti. di solito possono vivere fino ad un massimo di 2 settimane. |
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coltura primaria cardiomiociti
Didattica e Relazioni
