| Autore |
Discussione |
|
|
Miss Adenina
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
45 Messaggi |
 Inserito il - 07 giugno 2006 : 12:04:07
|
quali sono ad oggi i metodi più utilizzati in laboratorio per ottenere la separazione di una proteina di nostro interesse da una miscela proteica?
|
|
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
|
|
domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 07 giugno 2006 : 12:15:00
|
| Elettroforesi bidimensionale e si stanno iniziando ad usare anche cromatografie bidimensionali, che consistono nel fare due cromatografie consecutive che separano per due proprietà diverse (x es. massa molecolare e idrofobicità) |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
 |
|
|
Miss Adenina
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
45 Messaggi |
Inserito il - 07 giugno 2006 : 12:34:47
|
Citazione:
Messaggio inserito da domi84
Elettroforesi bidimensionale e si stanno iniziando ad usare anche cromatografie bidimensionali, che consistono nel fare due cromatografie consecutive che separano per due proprietà diverse (x es. massa molecolare e idrofobicità)
che mi dite della Cromatografia isoelettrica?
in pratica è un'applicazione della cromatogr a scambio ionico
si fa passare la miscela in 2 colonne cromatogr consecutive (una con scambiatore di anioni, l'altra con scambiatore di cationi).
e poi ci sarebbero:
- gel-filtrazione (o cromatogr per esclusione molecolare)
- cromatogr per affinità
- precipitazione frazionata con sali o con solventi organici o isoelettrica
- dialisi
- ultracentrifugazione
sono ancora attuali ??? |
|
|
|
AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 07 giugno 2006 : 12:45:52
|
certo che sono attuali!
Ogni proteina ha una "storia" di purificazione a se...una proteina, un biochimico! |
 |
|
|
|
Miss Adenina
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
45 Messaggi |
Inserito il - 07 giugno 2006 : 13:07:36
|
Citazione:
Messaggio inserito da AleXo
certo che sono attuali!
Ogni proteina ha una "storia" di purificazione a se...una proteina, un biochimico!
Uau! che racconti avvincenti!!!
 |
|
|
|
Miss Adenina
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
45 Messaggi |
Inserito il - 07 giugno 2006 : 14:16:57
|
stavo meditando  sulle risposte che mi avete gentilmente "elargito"...
...e mi chiedevo: ma l'HPLC non è più specifico per la separazione degli aa???
forse mi sbaglio! |
|
|
|
kORdA
Utente Attivo
Prov.: Milano
Città: Monza
1303 Messaggi |
Inserito il - 07 giugno 2006 : 14:42:28
|
| Non dimentichiamoci che c'e' pure l'elettroforesi capillare in tutte le sue molteplici forme (tecnica che - a parer mio - condivide con l'elettroforesi tradizionale solo il principio teorico)... |
http://www.linkedin.com/in/dariocorrada |
|
|
|
fpotpot
Utente
Città: middleofnowhere
1056 Messaggi |
Inserito il - 07 giugno 2006 : 14:49:50
|
| no,l'hplc e' usato per le proteine.ci saran anche hplc per aa,ma di sicuro e'una tecnica cromatografica usata per purificare intere proteine. |
|
|
|
Saretta
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Provincia di Roma
263 Messaggi |
Inserito il - 17 giugno 2006 : 13:25:24
|
Mi date una mano a risolvere 'sto problemino?
Quali tecniche si potrebbero utilizzare per purificare le tre proteine(di cui è riportata la composizione amminoacidica) contenute nella seguente miscela:
1)Ala 10% Gly 20% Asp 20% Glu 15% Pro 5% Ser 20% Cys 10%
2)Ala 30% Gly 20% Asn 5% Glu 20% Ser 10% Val 10% Thr 5%
3)Ala 20% His 10% Lys 10% Ser 10% Val 10% Thr 5% Arg 10%
non dispondendo di anticorpi contro la proteina 3? Spiegare perchè e quale tecnica ha maggiore probabilità di successo.
Grazie mille |
|
|
|
kORdA
Utente Attivo
Prov.: Milano
Città: Monza
1303 Messaggi |
Inserito il - 17 giugno 2006 : 14:32:12
|
Citazione:
Messaggio inserito da Saretta
Mi date una mano a risolvere 'sto problemino?
Quali tecniche si potrebbero utilizzare per purificare le tre proteine(di cui è riportata la composizione amminoacidica) contenute nella seguente miscela:
1)Ala 10% Gly 20% Asp 20% Glu 15% Pro 5% Ser 20% Cys 10%
2)Ala 30% Gly 20% Asn 5% Glu 20% Ser 10% Val 10% Thr 5%
3)Ala 20% His 10% Lys 10% Ser 10% Val 10% Thr 5% Arg 10%
non dispondendo di anticorpi contro la proteina 3? Spiegare perchè e quale tecnica ha maggiore probabilità di successo.
Grazie mille
Se dovessi rimanere sulla cromatografia io userei:
- scambio ionico per le proteine 1 e 3 (con resine rispettivamente a scambio anionico e cationico)
- con la proteina 2 userei una tecnica a fase inversa |
http://www.linkedin.com/in/dariocorrada |
|
|
|
Saretta
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Provincia di Roma
263 Messaggi |
Inserito il - 17 giugno 2006 : 14:35:57
|
| Mi spieghi il come mai di questa scelta? |
|
|
|
kORdA
Utente Attivo
Prov.: Milano
Città: Monza
1303 Messaggi |
Inserito il - 17 giugno 2006 : 14:46:04
|
Citazione:
Messaggio inserito da Saretta
Mi spieghi il come mai di questa scelta?
Guardando i residui:
- La 1 deve essere una proteina acida (per il contenuto di Asp, Glu e se vuoi pure di Cys)
- Analogamente la proteina 3 dovra' avere un carattere piu' basico (Arg Lys e His formano insieme il 30%)
- La proteina 2 invece presenta un contenuto maggiore in residui idrofobici (Ala e Val) |
http://www.linkedin.com/in/dariocorrada |
|
|
|
mastrascia
Nuovo Arrivato
20 Messaggi |
Inserito il - 25 giugno 2007 : 20:30:48
|
salve a tutti,
riprendendo questo topic volevo chiedere alla cortese attenzione...
quando parliamo di HPLC a fase inversa (ad esempio) eqipaggiata con una colonna C4... quel C4 esattamente cosa mi sta ad indicare?
è il numero di atomi di carbonio delle catene legate alla fase stazionaria? (oppure ho detto una boiata?)
grazie infinite a tutti voi
mast  |
|
|
|
Cangrande
Utente Junior
Prov.: Verona
280 Messaggi |
Inserito il - 25 giugno 2007 : 21:38:15
|
| Nella reverse phase la fase stazionaria apolare è formata da butil(C4) o Ottil(C8) o ottadecil(C18) silanosani. Quindi ciò che hai detto è giusto! |
Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala. |
|
|
|
Cangrande
Utente Junior
Prov.: Verona
280 Messaggi |
Inserito il - 25 giugno 2007 : 21:49:23
|
| per Miss Adenina --> la moda in campo cromatografico dice Mud-PIT (multidimensional protein identification technology) e MDLC (multidimensional liquid chromatography) che sono quelle che ti hanno suggerito anche gli altri. Per le metodiche elettroforetiche direi IEF, PAGE e mappe bidimensionali. |
Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala. |
|
|
| |
Discussione |
|
Purificazione delle proteine
Didattica e Relazioni
