RNA da cellule fissate

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kk74
Nuovo Arrivato

23 Messaggi

Inserito il - 18 gennaio 2010 : 19:05:37

ciao a tutti, sapreste dirmi se è possibile estrarre RNA da cellule fissate in PFA? c'è un protocollo preciso?
grazie in anticipo

ukitel
Nuovo Arrivato

78 Messaggi

Inserito il - 18 gennaio 2010 : 22:19:00

E' possibile, ci sono kit pensati appositamente per estrarre RNA da cellule fissate anche in PFA (la Qiagen fa buoni kit).
Non è semplicissimo estrarre un buon quantitativo, se hai problemi non esitare a chiedere, perché ho un amico che è un guru in questa cosa.
Nel caso di analisi successive tieni presente che, a causa del tipo di fissazione, l'RNA ma anche il DNA eventualmente estratto saranno molto molto frammentati, per cui non puoi amplificare lunghi frammenti... Molte persone "ignorano" questa cosa e non riescono ad ottimizzare le loro metodologie: insomma se ti tieni basso (<100 bp) puoi fare tutto ciò che vuoi.