Mappa di restrizione da una Southern

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LorenZ
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95 Messaggi

Inserito il - 22 gennaio 2010 : 17:55:06

Ciao a tutti, spero che qualcuno possa darmi una mano con questo dubbio che mi affligge da parecchi giorni.
Partiamo dal fatto che il mio scopo � quello di utilizzare diversi enzimi di restrizione per "tagliuzzare" il mio frammento di DNA, ottenuto con l'enzima di restrizione EcoRI ad entrambe le estremit�( ne voglio ricavare la mappa di restrizione). Nota il frammento corrisponde al gene della METIONINA

1)Utilizzo diversi enzimi di restrizione ed ottengo ( con la southern )un grafico simile a questo.

-...........................................................+
EcoRI________100|
BamHI+EcoRI__________60|_______40|
BamHI__________________|_________|
SalI+BamHI________________42.5|__|__________15|_________________|
SalI__________________55|_____|______________________________2.5|
SalI+EcoRI______________|_____|_________________________________|

2)Aggiungo il gene della metionina, come sonda ( in modo che vada ad appaiarsi con i frammenti necessari per riottenere il dna douplex del gene ) e i frammenti che vengono legati sono questi.

__________- ....................................................+
EcoRI__________100|
BamHI+EcoRI____________________40|
BamHI____________________________|
SalI+BamHI_______________________|
SalI__________________55|
SalI+EcoRI______________|

3) Da tutto ci� come posso dire che la mappa di restrizione � la seguente?

EcoRI__________BamHI____SalI____________________SalI______EcorI
|----------------|-------|-------------------------|---------|
_________40_________15______________42.5_______________2.5
Met

Spero possiate aiutarmi, spiegandomi il processo logico che c'� dietro perch� non riesco proprio a venirne a capo.
Ps. Quanto detto nel punto 2 � giusto? Perch� scrivendolo � sorto qualche dubbio.