Conservazione di campioni per Western Blot

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_pietro_
Nuovo Arrivato

Citt�: Lund

104 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2010 : 17:18:36

Ciao a tutti,

giorni fa stavo eseguendo un western, ma ho sbagliato il calcolo della quantita' dei campioni. Fattosta che alla fine mi sono rimasti l'equivalente di un nuovo pozzetto per ogni campione, alcuni dei quali piuttosto preziosi. Quindi li ho conservati a -20 e giusto oggi li sto riutilizzando. Quello che mi chiedevo e' questo:

1) Posso preparare grosse quantite di sample ready-to-use (con tanto di loading buffer) mantenendo una buona resa?
2) In caso positivo, quanto ne posso preparare e per quanto li posso conservare a -20?
3) Devo aggiungere nuovo agente riducente ed eseguire nuova bollitura a 95 gradi nel momento del bisogno? (questo comunque l'ho fatto per precauzione)

Nella mia inesperienza l'ho scoperto solo ora e sarebbe un bel guadagno di tempo e materiale.

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2010 : 21:08:09

Io preparo spesso i campioni il giorno prima con il laemmli, li tengo a 4�C per�. Non mi piace il congelo/scongelo. Una volta li ho ~~dimenticati~~ tenuti di proposito in frigo per una settimana. Nessun problema. Con il laemmli li lascio anche ON a temperatura ambiente e il giorno dopo li carico senza bollire...
Fai un po' tu!!

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

Iside
Utente Attivo

Citt�: Napoli

1375 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2010 : 10:32:51

concordo con domi, puoi tenere i campioni in frigo per qualche giorno, io per conservarli pi� di una settimana preferisco comunque congelare a -20�C. La bollitura invece la faccio sempre, tanto male non fa.

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...

_pietro_
Nuovo Arrivato

Citt�: Lund

104 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2010 : 15:30:34

Grazie delle risposte piuttosto confortanti. Poi quel Western di cui sopra l'ho finito... usato un anticorpo che venerdi' scorso ha funzionato splendidamente e oggi nada de nada..

... come diceva Ascanio Celestini in uno dei suoi monologhi... "CE VO' TANTA PAZIENZA"