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Valentina86_
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
 Inserito il - 25 febbraio 2010 : 17:07:57
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Ciao a tutti!!
Nel mio lab abbiamo avuto un problema di resa di metafasi da cellule HeLa in adesione...Abbiamo fatto diverse prove utilizzando sia PBS che IPOTONICA 0.1M,1h e 30' di Colchicina,ma abbiamo ottenuto vetrini con pochissime metafasi,oltretutto eccessivamente contratte ...Potreste darmi gentilmente qualche consiglio? vi ringrazio!!
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-VaLeNtiNa- |
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ukitel
Nuovo Arrivato
78 Messaggi |
Inserito il - 26 febbraio 2010 : 14:32:28
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Io lavoro in citogenetica... Ti posso aiutare...
Ti avverto che è tutta una questione ti trial-and-error, per cui dovrai fare molti tentativi prima di trovare il tuo protocollo giusto.
Da quel poco che hai scritto posso immaginare che non sia solo un problema di "resa": spiegami più nel dettaglio i tentativi che hai fatto, e posso darti qualche consiglio. |
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Valentina86_
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2010 : 16:31:05
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ok,anche il nostro è un lab di citogenetica molecolare.
Le cellule HeLa sono state cresciute in piastra con terreno DMEM,e l'air drying è stato fatto sulle cellule in adesione.
Dato che studiamo i siti fragili abbiamo aggiunto 24 h prima delle sostanze inducenti i siti fragili stessi.
1h e 30' prima dell'air drying abbiamo aggiunto la colchicina
Abbiamo rimosso il terreno,fatto 2 lavaggi in PBS,tripsinizzato le cellule che abbiamo raccolto per centrifugazione(in PBS),rimosso il sovranatante e aggiunto ipotonica 0.1M oppure PBS,lasciato agire per 7'.
Abbiamo fatto una serie di passaggi in fissativo e dopo l'ultima centrifuga abbiamo lasciato asciugare il pellet che poi è stato risospeso in qualche goccia di fissativo ed utilizzato direttamente x preparare i vetrini.
Ti ringrazio tantissimo!!! |
-VaLeNtiNa- |
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