Mutagenesi ATG

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Chimica e propedeutica biochimica. Con CD-ROM
Luciano Binaglia, Bruno Giardina

Dizionario di biologia
Autori Vari

Genetica molecolare umana
Jack J. Pasternak

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

MolecularLab

Biologia Molecolare

Mutagenesi ATG

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Biologia Molecolare:

Didattica

Blog Inside the Cell

Protocolli

Siti di Biologia Molecolare e Tecniche

Quiz

Ultime notizie

Aggiungi i tag

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

green
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 10 marzo 2010 : 13:34:45

Salve ragazzi,volevo chiedervi un parere su una mutagenesi che dovrei fare e non s� se sar� possibile. Il mio vettore ha il suo tag al N-terminale (HA). Io volevo mutagenizzare l' ATG sia del tag che il primo ATG del cDNA perch� voglio che la traduzione cominci dall' ATG succesivo al primo nel cDNA.Ricordo per� che tra la Shine - Dalgarno e il codone di inzio ci deve essere una spaziatura ottimale che � di pochi nucleotidi (8 bp). Che mi consigliate ?

Dionysos
Moderatore

Citt�: Heidelberg

1913 Messaggi

Inserito il - 10 marzo 2010 : 13:37:52

Ma devi esprimere in batteri o in eucarioti?

Non fai prima a levare di mezzo il frammento di restrizione
del tag , invece di star l� a fare due mutagenesi?

Forse non ho capito bene cosa vuoi fare.

Volere libera : questa � la vera dottrina della volont� e della libert�
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!

green
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 10 marzo 2010 : 14:13:13

Devo esprimere in eucarioti . Ma comunque se elimino il tag mi rimane sempre il primo atg del cDNA.

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 10 marzo 2010 : 14:56:24

Ma scusa a questo punto non ti conviene riclonare il frammento eliminando il Tag e inserendo il frammento dall'ATG che ti interessa?

N.B. la Shine-Dalgarno viene utilizzata nei procarioti.

green
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 10 marzo 2010 : 15:53:02

Mi ritrovo gi� i primer di mutagenesi sia per il primo atg che per il secondo. In teoria quindi posso utilizzarli e il ribosoma censiderer� il primo atg utile quindi il mio ? Scusatemi se sono poco chiara � il mio primo approccio ad un blog del genere . Grazie mille .

Dionysos
Moderatore

Citt�: Heidelberg

1913 Messaggi

Inserito il - 10 marzo 2010 : 21:23:39

Secondo me fai molto prima a partire dal costrutto senza tag,
come dice GFPina (a meno che tu non stia facendo appositamente
tutto ci� per poter avere la sequenza tag nella 5'UTR, per qualche
strano motivo). E' sufficiente mutagenizzare il primo ATG della tua
ORF e dovresti essere a posto. Per le questioni di spaziatura, devi
fare riferimento alla sequenza di Kozak (equivalente della Dalgarno
negli eucarioti, ma diversa per propriet� e composizione) che in ogni
caso comprende anche il tuo ATG, per cui dovrai necessariamente subire
la forza relativa del tuo codone di initiation e del suo immediato intorno.

Volere libera : questa � la vera dottrina della volont� e della libert�
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!

green
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 12 marzo 2010 : 11:59:19

grazie mille ragazzi

Discussione

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Vai a:

MolecularLab.it

Android e Mobile



Scarica le app! Ora anche sul tuo smartphone!

Ciao Login - Iscriviti



Visitatori: 59

Novità
Fatti vedere: inserisci la tua foto. Il tuo curriculum vitae, sul sito: visto da aziende e professori.