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laethitia
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
 Inserito il - 19 marzo 2010 : 20:57:07
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salve a tutti, è da anni che grazie a questo forum ho trovato interessanti spunti o risposte ai miei dubbi, da quelli più semplici a quelli più impegnativi.
Mi trovo in una situazione veramente strana.
Sto utilizzando il protocollo della stratagene per introdurre due mutazioni sito specifiche, utilizzando una coppia di primer di 45bp.
Dalla PCR sembrava che tutto procedesse al meglio, ma quando ho ricevuto il risultato del sequenziamento del gene, mi sono accorta che, a valle del punto di mutazione, ho 4 ripetizioni in tandem del mio primer, dopo i quali la sequenza ricomincia correttamente...non so come sia possibile e non so neppure come risolvere il problema, strutture secondarie le escluderei perchè ho visto che le ripetizioni contengono l'intero primer. il prodotto della pcr del plasmide vettore è molto pulito, per cui escluderei anche dimeri di primer.
cosa posso fare???
ringrazio tutti anticipatamente per l'aiuto!
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laethitia
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 02 luglio 2010 : 10:54:10
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salve a tutti, di nuovo...dunque alla fine sono riuscita ad ottenere i miei mutanti, sebbene non sia stata in grado di comprenderne le cause!
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ripetizione in tandem del primer dopo pcr
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