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Inserito il - 25 marzo 2010 : 15:02:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di n/a Invia a n/a un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti,
ho una richiesta un pò strana da fare, spero che qualcuno possa aiutarmi!
Dovrei fare delle ricerche sull'utilizzo di un enzima di restrizione Hae III, vorrei sapere se qualcuno sa spiegarmi come funziona, dove e come avviene il taglio..
Inoltre cercavo qualche informazione sul gene CA VI (Carbonic Anhydrase 6), che tipo di gene è? su quale cromosoma si trova e per cosa trascrive?
Inoltre vorrei sapere e c'è una procedura e una metodica esatta per effettuare dei tagli con questo enzima di restrizione su questo gene..
Vi ringrazio anticipatamente!

darkene
Utente Junior

occhi



291 Messaggi

Inserito il - 25 marzo 2010 : 17:41:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di darkene Invia a darkene un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
1) Hae III: vedi sito NEB
2) CA VI: vai su ensembl e cercalo. li troverai tutte le info che cerchi
3) la metodica "esatta" su questo gene è la stessa che su tutti gli altri e la trovi sul sito NEB. L'unica cosa è vedere se e quanti siti di taglio ci sono. Recupera la sequenza del gene (ad esempio su ensembl o su NCBI e usala in questo programma online: http://tools.neb.com/NEBcutter2/
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25 Messaggi

Inserito il - 25 marzo 2010 : 20:24:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di n/a Invia a n/a un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille!! sto provando a fare queste ricerche che mi hai detto e mi si sta aprendo un nuovo mondo!! L'unica cosa che ti chiedo, e anzi riformulo meglio la domanda.. Questa metodica esatta usata per tutti i geni, per caso esiste anche in qualche sito in italiano? grazie ancora!
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25 Messaggi

Inserito il - 25 marzo 2010 : 20:34:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di n/a Invia a n/a un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io purtoppo, anche entrando nella sezione delle metodiche sul sito NEB non so neanche dove girarmi per cercare quello che mi serve..
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 25 marzo 2010 : 20:40:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Pinkydea

Questa metodica esatta usata per tutti i geni, per caso esiste anche in qualche sito in italiano?

Non è che "questa metodica" sia qualcosa di complicato, è un semplicissimo taglio con un enzima di restrizione, non hai bisogno di grandi conoscenze dell'inglese per fare la metodica.
Dal sito della NEB (darkene ti ha indicato quello perchè praticamente è uno dei migliori, hanno tutti gli enzimi di restrizione) per Hae III: http://www.neb.com/nebecomm/products/productR0108.asp

la metodica è:
Citazione:
Reaction Conditions:
1X NEBuffer 4
Incubate at 37°C.

cioè non fai altro che mettere DNA, Enzima e buffer e incubare a 37°C in genere per 1h.

La sequenza che taglia la vedi all'inizio, è:
5’ GG^CC 3’
3’ CC^GG 5’
(^ indica il punto di taglio)
a questo punto devi solo vedere nel gene che ti interessa quante sequenze GGCC hai e dove sono.

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