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_ARY_
Nuovo Arrivato
Prov.: mi
Città: milano
81 Messaggi |
 Inserito il - 09 aprile 2010 : 13:33:33
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ciao a tutti,
sto studiando per l'esame di farmacologia generale,nel programma c'è anche una parte sui topi transgenici e knock out.
vi pongo il mio dilemma:
non mi è molto chiaro il concetto di ricombinazione omologa(mi riferisco alla formazione di un topo KO) tra il dna plasmidico e quello bersaglio. help
grazie a tutti coloro che risponderanno
ps scusate se la domanda non è chiarissima,ma non è chiaro nemmeno a me cosa non mi convince!
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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 09 aprile 2010 : 18:04:06
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uhmm...
Vediamo un po'...
Sicuramente saprai della meiosi, dove i cromosomi omologhi si appaiano per omologia di sequenza nucleotidica e possono formare dei crossing-over (http://it.wikipedia.org/wiki/Giunzione_di_Holliday).
In parole povere, in questa fase la cellula allinea i cromosomi 2 a 2 in base al fatto che siano uguali in alcuni tratti e scambia zone del cromosoma A con il cromosoma omologo B. Questo processo porta alla sostituzione di alcune regioni cromosomiche con altre equivalenti.
La tecnica che tu hai citato fa uso di un processo molto simile a questo che però avviene tra un cromosoma ed un plasmide.
Nel plasmide tu metti una lunga sequenza che è uguale a quella presente nel cromosoma, poi una mutazione che vuoi inserire, poi ancora una lunga sequenza omologa al cromosoma.
Se inserisci questo plasmide molto grande in alcune cellule e sotto opportune condizioni, può capitare che il suddetto meccanismo di ricombinazione possa appaiare per errore un cromosoma con il tuo plasmide. Il risultato che ottieni è un cromosoma che ha incorporato quello che avevi nel plasmide, ad esempio un gene KO, e nel plasmide va a finire il gene funzionante.
Il plasmide è perso dalla cellula quasi subito, mentre la mutazione cromosomica rimane nella cellula.
A questo punto non devi far altro che "trovare" o "selezionare" le cellule mutate e generarci un topo. Il topo ovviamente sarà eterozigote per la mutazione che hai voluto inserire.
Questo metodo si dice per ricombinazione, poiché è una sostituzione di DNA per ricombinazione, ed omologa perché le zone che hanno avuto la ricombinazione sono uguali (quelle prima della mutazione e dopo la mutazione).
Il metodo ti permette di inserire o modificare un tratto di DNA della cellula in modo preciso e mirato, ottimale per fare un KO di un gene specifico.
Il metodo contrapposto è il transgenico, ovvero ricombinazione non omologa, in cui tu hai un DNA completo di promotore che codifica per la proteina X e lo inserisci nelle cellule sperando che casualmente possa essere incorporato nel DNA genomico. Si avrà così l'espressione del gene X, ma purtroppo non puoi ben sapere dove questo gene si è andato ad inserire. Quindi ogni volta che si genera un topo di questo tipo non è prevedibile dove andrà a finire il gene X.
Spero sia chiaro
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_ARY_
Nuovo Arrivato
Prov.: mi
Città: milano
81 Messaggi |
Inserito il - 09 aprile 2010 : 18:24:20
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ho capito cosa mi turbava...si si conosevo il concetto di meiosi e la ricombinazione omologa che avviene li,non riuscivo a immaginarla tra il plasmide e il cromosoma del topo.
quindi scusa la ricombinazione avviene solo perchè costurisco il plasmide in modo tale che abbia tratti nucleotidici omologhi al cromosoma a meno del tratto che voglio aggingere.
ho capito bene?grazie per aver risposto :) |
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prossima biologa
Utente Attivo
1437 Messaggi |
Inserito il - 09 aprile 2010 : 18:57:42
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| si,altrimenti non potresti avere la ricombinazione omologa... gia cm ti ha detto neuroscience avviene"per errore" che il dna palsmidico di appaia e ricombina con il cromosoma del topo... se la sequenza prima e dopo la mutazione non sono tra loro omologhe,la ricombinazione omologa non può avvenire! |
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ricom.omologa topi KO
