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 Biologia Molecolare
 sequenziamento e mutazioni puntiformi
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Utente Junior



565 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2010 : 19:11:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lā Invia a lā un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti! scusate, magari la domanda č scema.....se dopo un clonaggio mando il mio plasmide a sequenziare e continuo ad ottenere delle mutazioni puntiformi nella sequenza, quale puō essere la causa?

Laracroftit
Nuovo Arrivato

arabidopsis

Cittā: Sassari


37 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2010 : 19:15:41  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Laracroftit  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Laracroftit Invia a Laracroftit un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
E' appena successo anche a me... Quando hai fatto la PCR per il frammento da clonare, quanti cicli hai fatto? perche' piu' cicli fai e maggiore e' la probabilita' di avere errori.
E un'altra cosa importante e' la Taq che hai utilizzato. Di solito per clonaggi uso la Pfx,ma dipende comunque da cosa stai facendo...

"I want to know God's thoughts...
...the rest are details."
(Albert Einstein)
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SpemannOrganizer
Utente

Spemann

Cittā: Los Angeles


955 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2010 : 20:24:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpemannOrganizer Invia a SpemannOrganizer un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io ti suggerirei di far sequenziare anche il plasmide da cui hai ottenuto il tuo costrutto (se per esempio hai richiesto il gene ad un altro lab) e confrontare la sequenza... A volte le variazioni di sequenza sono dovute a polimorfismi che puoi trovare nei database
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Utente Junior



565 Messaggi

Inserito il - 15 aprile 2010 : 10:37:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lā Invia a lā un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie! il problema non l'ho avuto io, ma una mia amica. le chiederō le informazioni che mi avete suggerito! grazie mille!
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