Problemi con ARMS-PCR

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EROTAVLAS
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16 Messaggi

Inserito il - 28 aprile 2010 : 14:17:27

Ciao a tutti
sto mettendo a punto un protocollo di ARMS-PCR su campioni gi� genotipizzati con microarray. Utilizzando 2 coppie di primer una esterna alla mutazione ed una interna. Ma sto riscontrando grossi problemi di amplicato aspecifico, infatti il risultato atteso per wt � di una banda a 259 bp mentre per il mut a 280. La Taq utilizzata � una dreamTaq della fermentas in un portocollo in cui le conc. dei primer sono differenti.
Ho provato anche ad aggiungere DMSO 5% ma l'aspecifico rimane.
Iniziano a venirmi seri dubbi sui campioni.
Voi cosa ne pensate
Grazie

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