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mo-lab
Utente Junior

Città: utrecht


348 Messaggi

Inserito il - 03 maggio 2010 : 16:57:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mo-lab Invia a mo-lab un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi ho una domanda...ho avuto delle colonie (40)dopo la trasformazione con il mio plasmide in cui ho clonato un inserto (sal e nco1)..nella plate ctr neg ne ho una sola (??).
Oggi volevo confermare tramite pcr da colonia..premettendo che non lho mai fatta..non e venuto nulla..cosa pensate?

SpemannOrganizer
Utente

Spemann

Città: Los Angeles


955 Messaggi

Inserito il - 04 maggio 2010 : 09:25:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpemannOrganizer Invia a SpemannOrganizer un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Senti, non ho la risposta a questa domanda, ma ti posso raccontare un aneddoto che forse ti risolleverà un pò. Tempo fa feci un clonaggio e di seguito una pcr per vedere se il mio inserto era presente. Niente. Mi dissi forse qualcosa nella pcr o nel programma della termiclatore non ha funzionato a dovere. Vado a fare la doppia digestione per tagliare fuori l'inserto. Ancora nulla. Ma non vedevo nemmeno il plasmide intero. Vado quindi a correre il plasmide che avevo estratto con la mini (cosa che AVREI DOVUTO fare ben prima di tutto questo) e semplicemente non c'era. Qualcosa era andato storto nella mini.

Avevo però conservato un pò di batteri dalla pre-cultura, dai quali feci una midi prep e tutto andò bene (e vissero felici e contenti...).


Questo per dirti che tutto può essere. Non disperarti per l'esito negativo della pcr, però fai tutti gli opportuni controlli per poter escludere ogni eventualità.
Saluti e in bocca al lupo




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mo-lab
Utente Junior

Città: utrecht


348 Messaggi

Inserito il - 04 maggio 2010 : 10:46:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mo-lab Invia a mo-lab un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
m e venuta la pcrda colonia
ho il clone
ho bollito i batteri prima
yeahh
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SpemannOrganizer
Utente

Spemann

Città: Los Angeles


955 Messaggi

Inserito il - 04 maggio 2010 : 10:49:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpemannOrganizer Invia a SpemannOrganizer un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
brava!
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mo-lab
Utente Junior

Città: utrecht


348 Messaggi

Inserito il - 04 maggio 2010 : 11:49:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mo-lab Invia a mo-lab un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ps: la banda a 1700 ricompare magicamente..sicuro c e una contaminazione..
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SpemannOrganizer
Utente

Spemann

Città: Los Angeles


955 Messaggi

Inserito il - 04 maggio 2010 : 11:54:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpemannOrganizer Invia a SpemannOrganizer un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
strana sta cosa.. ma l'hai mandato a sequenziare?
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mo-lab
Utente Junior

Città: utrecht


348 Messaggi

Inserito il - 04 maggio 2010 : 13:28:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mo-lab Invia a mo-lab un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
non ancora
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