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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
 Inserito il - 15 luglio 2006 : 22:26:00
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Mi dareste, per favore, qualche informazione su questa tecnica, i suoi principi di base e i suoi vantaggi?
Grazie!
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La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
 Inserito il - 16 luglio 2006 : 00:26:17
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L'immuno PCR è una tecnica che permette di identificare livelli molto bassi di proteine, unendo una PCR a un saggio ELISA.
In sostanza funziona così: hai un anticorpo per la tua proteina fissato su di un supporto.
Ci metti sopra il lisato cellulare contenente (o meno) la proteina di interesse e poi usi un secondo anticorpo per la proteina. Questo secondo anticorpo è coniugato con un oligomero di streptavidina e DNA.
Ora puoi fare una PCR (la reazione precedente viene fatta in multiwell o strips che possono andare direttamente nel termociclatore) con primer biotinilati.
Infine fai un saggio ELISA per determinare quanto DNA hai amplificato (usando un anticorpo antibiotina coniugato a un enzima).
Il paper originale è questo
Anche questo articolo non sembra malaccio in realtà.
Per una spiegazione precisa del metodo guarda questa pagina (PDF). |
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
Inserito il - 17 luglio 2006 : 00:45:55
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
L'immuno PCR è una tecnica che permette di identificare livelli molto bassi di proteine, unendo una PCR a un saggio ELISA.
In sostanza funziona così: hai un anticorpo per la tua proteina fissato su di un supporto.
Ci metti sopra il lisato cellulare contenente (o meno) la proteina di interesse e poi usi un secondo anticorpo per la proteina. Questo secondo anticorpo è coniugato con un oligomero di streptavidina e DNA.
Ora puoi fare una PCR (la reazione precedente viene fatta in multiwell o strips che possono andare direttamente nel termociclatore) con primer biotinilati.
Infine fai un saggio ELISA per determinare quanto DNA hai amplificato (usando un anticorpo antibiotina coniugato a un enzima).
Il paper originale è questo
Anche questo articolo non sembra malaccio in realtà.
Per una spiegazione precisa del metodo guarda questa pagina (PDF).
Ti ringrazio!
Altra domandina: da quello che ho studiato, si potrebbe fare anche una Real Time Immuno PCR.
In questo caso, in base al procedimento che mi hai descritto, quando facciamo la PCR, dovremmo utilizzare delle sonde in puro stile Real Time (o comunque altri fluorocromi) per eliminare, di conseguenza, l'ultimo passaggio del saggio ELISA.
Giusto? Ho capito bene? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 17 luglio 2006 : 04:04:09
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Sì, non credo ci siano studi del genere in giro, ma in teoria si potrebbe fare come dici tu.
Esiste anche un altra tecnica più sensibile, chiamata IDAT.
Questo articolo descrive questa tecnica.
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
Inserito il - 17 luglio 2006 : 19:48:56
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Sì, non credo ci siano studi del genere in giro, ma in teoria si potrebbe fare come dici tu.
Esiste anche un altra tecnica più sensibile, chiamata IDAT.
Questo articolo descrive questa tecnica.
Ok, grazie ancora!
Comunque, riguardo la mia teoria, l'ho vista da una lezione. Se vuoi posso passarti il powerpoint. |
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 17 luglio 2006 : 23:35:50
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Sì grazie, non fa mai male! :)
Anche perchè probabilmente a breve inizierò a fare qualcosa del genere (credo IDAT però, perchè mi serve sensibilità molto più alta). |
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2006 : 22:31:41
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Resuscito questo topic per due motivi:
1) Mi sono dimenticato di dare il file a chick80 (ti ho aggiunto tra i contatti su msn)
2) Tornando alla tecnica, dovendo distinguere sinteticamente vantaggi e svantaggi di questo tipo di applicazione, voi cosa scrivereste? |
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Immuno-PCR
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