Problemi attività proteina dopo trasfezione di nuova maxi

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Emili
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1 Messaggi

Inserito il - 11 maggio 2010 : 17:57:26

Salve,
vi racconto in breve il problema che ho riscontrato.
Ho preparato una nuova maxi di un DNA di una proteina di cui seguo l'attività di ribosilazione.
Ho trasfettato il nuovo DNA in cellule che normalmente trasfetto ed ho fatto il mio solito saggio di ribosilazione....risultato non riesco + a vedere l'attività!
Per capire il problema ho prima di tutto verificato che si fosse espressa la proteina.....e c'era... poi fatto sequenziare il nuovo DNA per capire se potevano esserci mutazioni puntiformi che mi rendessero la proteina inattiva...ma anche qui la sequenza era corretta!
Ho testato le cellule trasfettando in parallelo il DNA della vecchia MAxi e quello della nuova......usando il vecchio DNA continuo a vedere l'attività....con il nuovo no!
Ho anche provato delle cellule competenti diverse per capire se magari il problema fosse quello....ma il risultato è stato sempre lo stesso!
Avete idee, suggerimenti a riguardo???HELP!

Dionysos
Moderatore

Città: Heidelberg

1913 Messaggi

Inserito il - 14 maggio 2010 : 01:26:45

Sei sicura di non aver cambiato nessun'altra variabile
tra preparazione plasmidica vecchia e nuova?
(anche solo l'acqua può essere cruciale)

Sei sicura di transfettare quantità eguali, ossia
sei sicura dell'affidabilità della tua quantificazione?

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!