Forum

Nome Utente:
Password:
Riconoscimi automaticamente
 Tutti i Forum
 Laboratorio
 Biologia Molecolare
 Contaminazioni PCR
 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
I seguenti utenti stanno leggendo questo Forum Qui c'è:

Aggiungi Tag Aggiungi i tag

Quanto è utile/interessante questa discussione:

Autore Discussione  

cometina
Nuovo Arrivato



2 Messaggi

Inserito il - 19 maggio 2010 : 17:20:25  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cometina Invia a cometina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
salve a tutti,
è da poco che ho a che fare con le pcr e sto facendo delle RT-PCR semiquantitative in cui amplifico sia il gene di mio interesse sia l'RNA 18 S per valutare l'espressione del mio gene rispetto a quest'ultimo. (è cmq una multiplex pcr)

mi trovo sempre a dover fare due mix perche studio due diversi geni.

una delle due pcr (sempre quella per lo stesso gene che chiamo "1") presenta il bianco quasi sempre sporco.

ho pensato fosse la stock dei primer ma diluisco ogni volta i primer e qualche volta il bianco è ok altre volte invece noo!!!

il bianco dell'altro gene (che chiamo gene "2") è sempre pulito...

non penso sia dovuto agli altri reagenti perche uso gli stessi reagenti quando faccio la mix per il gene 1 e per il gene 2...inoltre la faccio sempre nello stesso momento

uso sempre H2O ultra pura Carlo Erba , che aliquoto ogni volta in diverse eppendorfine..

devo sterilizzare i tubilli?

devo autoclavare l'acqua carlo erba?

uso punte con filtro e pipette dedicate solo alla pcr che non usa nessun altro...cos altro posso fare??

che pensate della mia storia ;)??? spero sia stata abbastanza chiara!!

grazie a tutti!

beppe.cib
Nuovo Arrivato



41 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2010 : 18:32:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di beppe.cib Invia a beppe.cib un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Come fai a vedere che il bianco è sempre sporco?
Torna all'inizio della Pagina

michy2
Nuovo Arrivato




44 Messaggi

Inserito il - 24 maggio 2010 : 12:41:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michy2 Invia a michy2 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
con bianco sporco intendi dire che nel gel vedi un'amplificato?
prova a pulire bene le pipette e il piano di lavoro, evita di fare l'RT dove apri prodotti di amplificazione, cambia spessissimo i guanti e attenta quando pipetti a non cross contaminare. puoi fare il bianco per primo, chiudere la provetta e poi dispensare l'RNA nei vari campioni.
spero di esserti stata di aiuto.
Torna all'inizio della Pagina

cometina
Nuovo Arrivato



2 Messaggi

Inserito il - 25 maggio 2010 : 14:42:19  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cometina Invia a cometina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si con bianco sporco intendevo dire questo, certo.

grz per tutti i consigli...mettevo in pratica gia tutti tranne il fatto di evitare di fare la RT li dove apro poi i tubilli con il cDNA..

grazie cmq per tutto il resto!
Torna all'inizio della Pagina

Gabriele
Utente

Prov.: Pisa
Città: Pisa


615 Messaggi

Inserito il - 25 maggio 2010 : 19:38:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gabriele Invia a Gabriele un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Pulisci qualunque cosa con NaOH 0,1 N

"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe."
Torna all'inizio della Pagina

michy2
Nuovo Arrivato




44 Messaggi

Inserito il - 26 maggio 2010 : 10:37:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michy2 Invia a michy2 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
[quote]Messaggio inserito da cometinagrz per tutti i consigli...mettevo in pratica gia tutti tranne il fatto di evitare di fare la RT li dove apro poi i tubilli con il cDNA..

è una regola fondamentalesi devono fare le reazioni di preamplificazione in luoghi separati rispetto a quelli dove si fa la post- amplificazione e la rivelazione
Torna all'inizio della Pagina
  Discussione  

Quanto è utile/interessante questa discussione:

 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
Vai a:
MolecularLab.it © 2003-18 MolecularLab.it Torna all'inizio della Pagina