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alice79
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 24 maggio 2010 : 23:42:23
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Ciao a tutti, sono nuova del forum.
lavoro in un lab di biologia molecolare.
ho un problema di sequenziamento che non mi era mai capitato prima.
sto tentando di sequenziare una banda molto lunga (13kb), molto pulita su gel dopo amplificazione. purifico, ricorro su gel, banda ancora bella, ma quando vado a sequenziare con vari primer (quelli con cui ho amplificato e vari primer interni) le sequenze o non vengono o sono molto brutte. poche volte leggibili (e per assurdo con i primer interni!). ho fatto varie prove di quantità di templato e ho tentato anche un'estrazione di banda da gel...risulati deludenti
sapreste indicarmi il motivo, il templato è troppo lungo? sono già riuscita con successo a sequenziare 10 kb, che ci sia tutta questa differenza? non posso amplificare con dei primer ancorati all'interno per vari motivi. esiste forse una reazione di sequenza per templati particolarmente lunghi? se qualcuno sa darmi qualche consiglio, o indicarmi qualche referenza..grazie mille
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 24 maggio 2010 : 23:57:03
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| tanto per sapere,con cosa eluisci alla fine l'amplificato? |
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alice79
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 25 maggio 2010 : 00:03:47
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| non so se ho capito cosa intendi, prima di sequenziare purifico, risospendo in 10 microlitri di formammide, denaturo e sequenzio. |
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