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 purificazioni di bande di gel di agarosio per qPCR????
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ElisabettaCardiff
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6 Messaggi

Inserito il - 27 maggio 2010 : 15:22:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ElisabettaCardiff Invia a ElisabettaCardiff un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti!
Sono una tesista all'estero...un po' lasciata a me stessa...
Sto facendo PCR per valutare l'espressione di alcune subunita' di vari canali.
Ora per valutare l'espressione, dobbiamo utilizzare la qPCR.
La mia domanda e' molto semplice. Per utilizzare la qPCR bstano i campioni di RT-PCR (alle concentrazioni che voglio io) o devo fare una procedura lunghissima (come qui mi dicono, ma di cui io non capisco il senso) che e' quella della purificazione del DNA. Ovvero, PCR, elettroforesi e poi taglio delle bande e purificazione di esse.
Io, se devo essere onesta, non so perche' si debba fare. Anche perche', da quello che ho capito, non tutti fanno questa procedura.
Mi hanno detto che dovrebbe bastare il normale RT-PCR.
Vi prego, aiutatemi!!!!!!
Grazie!!!!
Betta

miky76
Utente Junior



126 Messaggi

Inserito il - 29 maggio 2010 : 19:18:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di miky76 Invia a miky76 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si si sembri proprio persa e credo non vi siete capiti



ricapitoliamo

devi valutare l'espressione di alcune proteine
giusto?
quindi devi fare una qPCR e NON una PCR
la PCR ti dice se una gene e' presente ma non ti dice se e quanto e' espresso

quindi per una qPCR devi partire da una RT

a questo punto non capisco il passaggio PCR e purificazione della banda della PCR

dopo che hai la banda che ci fai?
la sequenzi e vedi se e' corretta o la usi per una ligazione
ma non ci puoi fare una qPCR
quindi non capisco cosa ti hanno detto di fare
o meglio cosa vogliono fare

forse un southern blot?

ti consiglio di tornare dal tuo supervisore
e senza paura chiedere spiegazioni e se non capisci richiedi
magari fatti fare uno schema di cosa vogliono fare

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