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Marianna
Utente Junior
146 Messaggi |
 Inserito il - 22 luglio 2006 : 19:26:11
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A ke stadio tra sds page - trsferimento e rilevazione posso fare una colorazione con il panceu? Nn l'ho mai fatto e mi interesserebbe anke avere un protocollino.
Thanks !
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Farah |
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valentina72
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
Inserito il - 23 luglio 2006 : 00:33:42
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| dopo il trasferimento, prima dell'incubazione. il Rosso Ponceau (si scrive così) serve per verificare il trasferimento delle proteine. Si usa tq e si riutilizza |
Vale |
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Marianna
Utente Junior
146 Messaggi |
Inserito il - 24 luglio 2006 : 08:38:34
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Grazie...sembrerà strano ma nn l'ho mai fatto !  |
Farah |
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valentina72
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
Inserito il - 24 luglio 2006 : 10:48:57
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| dopo che hai evidenziato le proteine, sciacqua la membrana con PBS (3 volte da 3 minuti ciascuna), quindi con acqua dist in modo da eliminare il colore |
Vale |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 25 luglio 2006 : 09:02:12
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Beh a me con il Rosso Ponceau funzionava quando ero in Germania... qua in Italia nel mio Lab non è mai funzionato, nonostante abbia provato diverse ricette e protocolli! Boh!!! 
Per quanto riguarda il Comassie io lo uso dopo il aver finito tutto (dopo lo sviluppo della lastra), tu lo usi anche prima al posto del rosso Ponceau Chick? Ma non rimane colorata la membrana a differenza del Rosso Ponceau? Non da fastidio negli steps seguenti?  |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 25 luglio 2006 : 23:59:13
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Si può togliere con una soluzione di 40% metanolo e 10% acido acetico in acqua.
Non l'ho mai fatto in realtà, però ce l'ho scritto sul protocollo! :) |
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andreone
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 06 febbraio 2009 : 13:59:23
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Secondo voi il rosso ponceau va fatto prima di bloccare la membrana (con BSA o latte)?
Facendolo dopo non dovrei avere un segnale completamente saturo? |
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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
Inserito il - 06 febbraio 2009 : 14:29:40
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| fallo subito dopo il trasferimento, metti il filtro in agitazione col rosso ponceau per qualche min uto e poi controlla se ci sono le bande, infine sciaqua il filtro come ti ha detto Pina, in PBS e poi con un pò d'acqua distillata. |
non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono. |
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andreone
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 06 febbraio 2009 : 17:08:19
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Suppongo che il rosso ponceau interferisca con la detection immunochimica e vada quindi rimosso, infatti nel foglietto illustrativo del rosso ponceau (della Sigma) mi dice di decolorare con 0.1 M NaOH se voglio poi continuare con la detection immunochimica (usando nitrocellulosa).
Siete d'accordo? Voi procedereste così?
Grazie tantissimo per l'aiuto. |
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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
Inserito il - 08 febbraio 2009 : 10:17:19
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si va rimosso, da me semplicemente lo recuperiamo in una falcon da 50ml e sciaquiamo semplicemente con acqua deionizzata fino a quando il rosso va via dal filtro. Oppure puoi usare PBS o anche NaOH.
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non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono. |
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biotecman
Nuovo Arrivato
40 Messaggi |
Inserito il - 13 febbraio 2009 : 16:55:01
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| ragazzi qualcuno sa con che tipo di legame chimico questo colorante si lega alle proteine??? |
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andreone
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 13 febbraio 2009 : 18:02:53
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Ti riporto quanto scritto dal produttore:
"Ponceau S is a negative stain which binds to the positively charged amino groups of the protein. It also binds non-covalently to non-polar regions in the protein. (Note: Ponceau S is not suitable for use with nylon membranes.)"
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Rosso Ponceau
Didattica e Relazioni
