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puntointerrogativo
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8 Messaggi |
 Inserito il - 10 maggio 2004 : 16:12:16
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ciao a tutti
ho un piccolo problemino sulle digestioni enzimatiche di una molecola.
Innanzitutto non trovo da nessuna parte le definizioni di digestione preparativa ed analitica;ma sopratutto non capisco un esercizio.
Ho una molecola di 5 Kb e dopo una digestione si ottengo 3 frammenti:
3Kb 1,5 Kb e 0,5 Kb.
Ho i seguenti dati
[DNA] = 2ug/ul
Enzima= 20 U/ul
DNA digestione analitca = 1ug
DNA digestione preparativa = 20ug
Devo trovare Volume di DNA,il volume dell'enzima e del buffer 10X e il volume totale.
A voi la parola... 
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2004 : 18:32:21
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La distinzione fra digestione "preparativa" ed "analitica" (vale anche per molte altre cose, non solo le digestioni) è che nella analitica vuoi solo vedere se un determinato evento accade (es. digerisci un certo plasmide per vedere se il gene si è inserito correttamente all'interno), mentre la preparativa ha lo scopo di ottenere una quantità, in questo caso di DNA, abbastanza grande da poter essere usata per i successivi esperimenti.
Ovviamente per una cosa preparativa ti serve più campione, perchè devi recuperarne il più possibile.
Per trovare i volumi la cosa è molto semplice:
hai 2 ug/ul di DNA, te ne serve 1 per la dig. analitica, quindi ti servono 0.5 ul di DNA. Per quella preparativa te ne servono 20 ug, quindi 10 ul.
Se non ricordo male 1 unità per gli enzimi di restrizione indica la quantità di enzima tale da digerire 1mg di DNA in 1 ora. Direi quindi che se dobbiamo digerire 1ug di DNA ci basta 1uU di enzima, quindi 1/20 ul (oppure 1ul per digerirne 20ug).
Infine il volume del buffer 10x lo trovi dividendo per 9 il volume di DNA+Enzima. Infatti se chiamiamo VD il vol. di DNA, VE quello di enzima e VB quello di buffer abbiamo:
VB = (VD+VE+VB)/10 , in quanto il buffer è 10x quindi deve essere 1/10 del volume totale. Quindi VB = VD/10+VE/10+VB/10 -->
9/10VB = (VD+VE)/10 ==> VB = (VD+VE)/9
Per trovare il volume totale somma il tutto!
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