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Autore

Discussione

cristiano
Nuovo Arrivato

Prov.: Novara
Citt�: novara

37 Messaggi

Inserito il - 02 agosto 2006 : 13:38:51

salve a tutti, devo fare uno studio di espressione, ho il mio RNA totale quantificato e una real time. A questo punto mi consigliate di usare una semplice retrotrascrittasi che usa oligo(dT) per il primo strand, random primer per il secondo e poi partire con la real time con primer specifici per il mio gene, oppure usare i kit one-step e sbattere direttamente tutto in real time?

grazie!

CRI

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 02 agosto 2006 : 22:08:28

Io ti consiglierei di fare prima una RT-PCR e poi la real time, almeno hai piu' controllo sui vari step del processo.... ma cmq i due metodi dovrebbero (almeno in teoria) essere equivalenti!

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AC
Nuovo Arrivato

45 Messaggi

Inserito il - 02 agosto 2006 : 22:10:34

ciao
dipende dal tipo di studio che devi fare.
Con una two step ottieni prima il cDNA poi questo viene usato in real time con primer specifici. Il vantaggio rispetto alla one step � che una volta ottenuto il cDNA puoi usarlo per diversi studi. invece con la one step l'RNA viene messo nella mix di reazione, retrotrascritto e amplificato nello stesso tubo, hai il vantaggio di ridurre i passaggi e/o eventuali errori manuali, ma il cDNA viene impiegato solo per quella reazione.

valuta un attimo tu
Ciao facci sapere

cin
Utente Junior

Prov.: Padova
Citt�: Padova

558 Messaggi

Inserito il - 03 agosto 2006 : 12:46:23

Noi facciamo sempre e solo two step.