Studio inserzioni transgene in Arabidopsis

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Endrew
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Inserito il - 12 luglio 2010 : 11:47:36

Buongiorno a tutti.
Poich� non sono del tutto convinto dei risultati ottenuti durante un'analisi del numero di copie di un transgene in Arabidopsis, desideravo illustrarvi la procedura seguita, qualora vi fosse qualche errore.
Dunque, dopo aver trasformato Arabidopsis con Agrobacterium, ho raccolto i semi (T0) dalle piante trasformate. Quindi ho selezionato su kanamicina tali semi T0 ed ho controllato che fossero transgenici tramite PCR. Quindi, da ciascuna pianta T0 originata da tali semi ho raccolto separatamente i semi T1. Ho poi screenato sempre su kanamicina i semi T1 per individuare i rapporti di segregazione 3/4 resistenti, 1/4 sensibili che dovrebbero indicare l'inserimento del transgene in un singolo locus. Successivamente, tramite Real-Time sul dna, ho analizzato il numero relativo di copie del transgene per distinguere le piante omozigoti da quelle emizigoti. A voi risulta che tale procedura sia corretta?