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 Biologia Molecolare
 Esperimento con E.coli plasmide pGLO e gene GTF
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Indie
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11 Messaggi

Inserito il - 18 luglio 2010 : 20:34:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Indie Invia a Indie un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve, ho un problema.
Nell'esperimento di trasformazione batterica con plasmide pGLO e subclonaggio di un deleto del gene GFP non riesco a capire perchè piastrando i batteri competenti(verdi fluorescenti) ne crescono molti di più che piastrando batteri ligati (bianchi).
Le piastre sono trattate con ampicillina e arabinosio.

So' che potrebbero mancare dei dati importanti ma da quel che ho capito dovrebbe essere un esperimento d'esempio abbastanza comune.

Indie
Nuovo Arrivato



11 Messaggi

Inserito il - 19 luglio 2010 : 16:38:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Indie Invia a Indie un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Forse non mi sono spiegato in modo chiaro.

Come risultato del mio esperimento ho una piastra divisa in due, in una parte ho delle colonie bianche che rappresentano l'efficienza di ligazione. Nella seconda parte ho molte più colonie verdi fluorescenti(la fluorenza la da il gene GFP) che rappresentano la competenza.
Quello che non mi è chiaro è il perchè di questa differenza di quantità di colonie, in entrambi i casi abbiamo una piastra con arabinosio e ampicillina, ed entrambe le colonie hanno il plasmide GLO che danno la resistenza all'ampicillina, ò'unica differenza è un colore diverso e una quantità minore delle colonie bianche ma perchè?
Forse non mi è chiara la differenza tra competenza, trasformazione ed efficienza di ligazione che da quanto ho capito è:
Competenza: vettore+frammento(ligato al vettore) nel batterio
Eff. di ligazione:percentuale di vettore+frammento(ligato al vettore)
Trasformazione: fase in cui vettore, vettore+frammento, frammento vengono "fatti" entrare nel batterio
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Indie
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11 Messaggi

Inserito il - 19 luglio 2010 : 16:50:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Indie Invia a Indie un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
aggiungo la spiegazione dell'esperimento che però non spiega la differenza di numero tra le colonie bianche e verdi


http://www.tecnicoagrarioeboli.it/html/ogm.html
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SpemannOrganizer
Utente

Spemann

Città: Los Angeles


955 Messaggi

Inserito il - 19 luglio 2010 : 18:35:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpemannOrganizer Invia a SpemannOrganizer un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non sarà semplicemente che hai meno vettore ligato? Può essere che il tuo clonaggio non sia stato così efficiente e quindi hai "pochi" vettori con il gene deleto. Pochi vettori ergo poche colonie di batteri trasformati

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