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Varry
Nuovo Arrivato



12 Messaggi

Inserito il - 25 luglio 2010 : 20:58:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Varry Invia a Varry un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ormai sto riempendo qst forum di miei domande!
volevo chiedere che differenza c'è a livello pratico in un esperimento di clonaggio se mi trovo di fronte ad estremità nette o coesive prodotte dagli enzimi di restrizione, e con quale dei due tipi è più difficile la ligation? e come posso aggirare il problema se ho un inserto che ha estremità coesive mentre il vettore ha estemità piatte? c'entra qualcosa la tecnica del fill in però non riesco a collegare le due cose

Lisa_86
Nuovo Arrivato

Prov.: RM
Città: Roma


19 Messaggi

Inserito il - 07 agosto 2010 : 18:37:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Lisa_86 Invia a Lisa_86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
se sia vettore che inserto hanno estremità piatte, l'inserto potrà inserirsi nelle due orientazioni e quindi bisognerà fare uno screening di funzione!
con le estremità coesive questo nn avviene perchèin genere tagli con 2 enzimi diversi e quindi l'inserimento può avvenire solo nel modo che hai deciso.

se però il vettore ha estremità piatte e l'inserto le ha coesive, puoi usare la klenow. è un enzima he ha attività polimerasica 5’ -> 3’ e esonucleasica 3' -> 5'. in questo modo ricrei estremità piatte anche sull'inserto.

poi, come detto sopra, dovrai screenare l'inserimento degli inserti!!!!!
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