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Vanilla Sky
Utente Junior




204 Messaggi

Inserito il - 03 settembre 2010 : 10:18:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Vanilla Sky  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi,
devo fare la separazione e conta di PBMC da sangue periferico: ho letto il protocollo, ma non mi è chiaro un punto..perciò chiedo il vostro aiuto!
Sinteticamente devo (scrivo le tappe principali fin dove sorge il mio dubbio): diluire il sangue venoso con soluzione fisiologica, stratificare con Fycoll Hypaque,centrifugare, raccogliere l'anello di cellule mononucleate, eliminare eventuali residui di Fycoll/siero e ricentrigugare, risospendere i PBMC in terreno e aggiungere il lisante...ecco è quest'ultimo passaggio che non mi torna.. come mai lo devo aggiungere?
Grazie 1000!!!

Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 03 settembre 2010 : 11:45:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao
il "lisante" (che potrebbe essere anche semplicemente acqua distillata)
serve semplicemente per distruggere i globuli rossi contaminanti l'anello.
Per quanto tu proceda in modo corretto e preciso, un minimo di contaminazione
è inevitabile, perchè i globuli rossi sono molto adesivi. Purtroppo sono così
abbondanti da falsare enormemente la tua conta, per cui è sempre opportuno
liberarsene sempre prima di fare una conta.

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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memole
Utente Junior

memole

Prov.: Brindisi
Città: brindisi


577 Messaggi

Inserito il - 04 settembre 2010 : 11:39:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di memole Invia a memole un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io faccio così: dopo aver prelevato l'anello lavo le cellule con PBS. Dopo 3 lavaggi allontano il PBS, aggiungo il lisante (io uso NH4Cl), lascio in incubazione sotto cappa per 10 minuti, centrifugo e allontani il surnatante, poi risospendo in terreno e conto.

Per ulteriori informazioni non esitare a chidere

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Vanilla Sky
Utente Junior




204 Messaggi

Inserito il - 04 settembre 2010 : 17:15:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Vanilla Sky  Rispondi Quotando
Grazie 1000!!
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