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Francuzz
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
 Inserito il - 08 settembre 2010 : 08:09:24
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qualcuno mi saprebbe indicare la corretta temperatura di conservazione del DNA, RNA e cDNA e perchè?
Inoltre come faccio a capire che la mia estrazione di RNA sia venuta bene oltre all'uso del nanodrop?
Grazie a tutti (questo forum fornisce molte spiegazioni su cose che ti dicono ormai solo per sentito dire) :-)
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 08 settembre 2010 : 11:25:43
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Il Dna (e quindi anche il cDNA) è abbastanza stabile, quindi se tenuto in buffer opportuno (tipo EB) che compensa l'acidità del DNA, può stare anche a 4° (-20° sarebbe meglio).
L'RNA invece è molto instabile, e da protocollo è consigliato di tenerlo precipitato in isopropano a -80. Io però lo tengo anche risospeso, sempre a -80 però.
Per vedere se l'Rna è buono puoi correrlo su gel e vedere se è degradato
Se è buono si vedono il 28S e il 18S.
I buffer per correre l'rna sono differenti da quelli del dna... |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 08 settembre 2010 : 11:40:49
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Distinguerei tra DNa plasmidico e DNa genomico:
il primo può essere congelato (-20°C) senza problemi
mentre il congelamento/scongelamento di DNA genomico
può danneggiarlo, specialmente in presenza di cristalli
di sale, pertanto è opportuno conservarlo a 4°C, ove fatto
salvo per contaminazioni fungine/batteriche, rimane stabile. |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Holland
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
Inserito il - 14 settembre 2010 : 20:12:49
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| quanto tempo può stare fuori dal -80 un campione da cui idealmente si vuole estrarre l'RNA senza rischio che venga degradato/danneggiato? se è necesario tenerlo fuori per alcuni minuti è meglio tenerlo conservato con un po' di azoto liquido, ghiaccio secco o ghiaccio normale? |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 14 settembre 2010 : 20:29:49
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| io per il DNA genomico mi faccio aliquote usa e getta |
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Holland
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
Inserito il - 14 settembre 2010 : 20:40:23
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| si io però parlo nel caso in cui per esempio hai dei campioni di tessuto da sistemare e ti tocca tirarli fuori dal freezer.. |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 15 settembre 2010 : 01:50:18
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Citazione:
quanto tempo può stare fuori dal -80 un campione da cui idealmente si vuole estrarre l'RNA senza rischio che venga degradato/danneggiato? se è necesario tenerlo fuori per alcuni minuti è meglio tenerlo conservato con un po' di azoto liquido, ghiaccio secco o ghiaccio normale?
Il meno possibile, in ghiaccio.
Comunque non puoi estrarre mRNA da tessuti
già congelati a secco : sono già compromessi. |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
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Holland
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
Inserito il - 15 settembre 2010 : 09:06:15
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| veramente?? quindi andrebbe estratto solo da tessuto "fresco" e sul momento? |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 15 settembre 2010 : 12:26:32
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Per l'RNA dipende sempre da cosa devi farci.
Se poi devi andare in real time e' logico che dovrai avere dei campioni il piu' perfettamente conservati, per cui userai tutte le precauzioni come il ghiaccio secco per sistemare dei campioni gia' a -80, oppure l'azoto liquido per il trasporto o l'RNA later.
Se invece, ad esempio, vuoi solo andare a vedere se nei tuoi campioni di tessuto, se c'e' o no un determinato virus, non hai bisogno della perfetta conservazione dell'RNA, vedi ad esempio su tessuti incllusi in paraffina. |
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Holland
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
Inserito il - 17 settembre 2010 : 15:04:10
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| Grazie per le risposte |
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Marlene
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
Inserito il - 24 novembre 2010 : 09:06:30
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ciao! ho dimenticato il mio DNA estratto (BAC) nella centrifuga a RT tutta la notte in etanolo 100% + sali. A qualcuno è mai successo? Secondo voi è ancora buono?
Grazie mille 
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temperatura di conservazione DNA, RNA e cDNA
Didattica
