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kiko6361
Nuovo Arrivato
Città: Verona
37 Messaggi |
 Inserito il - 14 settembre 2010 : 16:46:44
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Ciao a tutti. Avrei una domanda per voi.
Attualmente in laboratorio analizzo monociti estratti da sangue periferico allo scopo di valutare la funzionalità di una proteina di membrana. Dopo l’estrazione i monociti li piastro con RPMI+10%siero e una volta adesi alla plastica (dopo circa 1h), sostituisco il terreno con altro terreno RPMI+10%FBS+1%gln. Attendo 1 giorno circa e faccio l’analisi che va a buon fine!
Adesso vorrei fare la stessa cose su monociti congelati, ossia dopo aver estratto i monociti da sangue li congelo secondo i protocolli presenti in letteratura.
Quando scongelo i monociti una parte è morta ma quelli che aderiscono sembrano avere un bell’aspetto, ma l’analisi della mia proteina non da nessun risultato ;-(
L’analisi la faccio a 3 ore di distanza dallo scongelamento dei monociti perché se aspetto il giorno seguente, le cellule sono morfologicamente molto brutte e vanno in apoptosi. Avrei giusto bisogno di tenerle un po’ di più in cultura (2-3 giorni) in modo che i monociti comincino a riesprimere la proteina che devo analizzare.
La domanda è: secondo voi è una buona idea o perdo tempo? In tal caso pensavo di usare M-CSF, ossia un fattore di crescita, di differenziazione e di attivazione per i macrofagi ed i loro precursori.
Qualcuno di voi lavora con monociti congelati? Al limite sapreste segnalarmi qualche protocollo sullo scongelamento e mantenimento dei monociti in cultura?
Ringrazio anticipatamente per le eventuali risposte e scusatemi se mi sono dilungata un po’ troppo
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mantenere i monociti "scongelati" in cultura
