fissazione per il TEM

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Autore

Discussione

raimondo
Nuovo Arrivato

9 Messaggi

Inserito il - 23 settembre 2010 : 20:02:14

ciao avrei urgente bisogno dei protocolli di fissazione per fegato, milza e aorta di topo per il TEM. mi potreste aiutare???

support_biomatica_it
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 27 settembre 2010 : 20:48:43

Salve, questo protocollo si è dimostrato efficace nei nostri laboratori

1. Fix tissue in 2.5% glutaraldehyde in 0.1 M PBS (pH 7.4).
2. Cut up tissue into small blocks (1mm³) and continue fixing.
3. Wash in 3 changes 0.1 M PBS for 15 minutes each.
4. Post fix specimens in 1% Osmium tetroxide containing 1% potassium ferricyanide for 1 hr.
5. Wash in 3 changes 0.1 M PBS for 15 minutes each.
6. Dehydrate in graded series of alcohol (in PBS) for 15 minutes each:
1. 30% ethanol
2. 50% ethanol
3. 70% ethanol
4. 90% ethanol
5. 100% ethanol x 3
7. Dehydrate further in two 10 minute changes of propylene oxide. *
8. Infiltrate with a 1:1 mix of propylene oxide and epon for 1 – 3 hrs or overnight.
9. Infiltrate with pure epon overnight at 4° C or 1 hour at room temperature.
10. Continue infiltration with three 1 hour changes of epon.
11. Embed in pure epon at 37° C for 24 hours.
12. Cure for 48 hours at 60° C.

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