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_pietro_
Nuovo Arrivato

Città: Lund


104 Messaggi

Inserito il - 08 ottobre 2010 : 14:55:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di _pietro_ Invia a _pietro_ un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti,

vi martello per l'ennesima volta su western e dintorni.

Io uso un sample buffer (di estrazione) con questa ricetta:
0,0625M Tris-HCl
2% SDS
10% Glicerolo

Il mio loading buffer e':
1ml sample Buffer
30uL Blu di bromofenolo 0,4%

Ma se usassi buffer di estrazione diversi (come ad esempio semplicemente cambiando detergente, oppure CHAPS buffer, NP-40 buffer,RIPA, i diversi buffer di frazionamento ecc.) posso usare il mio loading buffer originale o devo farne su misura per gli altri buffer?

Mi fa un po' senso pensare di correre una elettroforesi con campioni estratti in CHAPS buffer e mescolargli un loading buffer preparato sulla base di un'altro.

Se sono riuscito ad essere chiaro (), cose ne pensate?

gilthanas
Nuovo Arrivato

0116_da_CIA



100 Messaggi

Inserito il - 09 ottobre 2010 : 13:10:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di gilthanas Invia a gilthanas un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
tranquillo...
va benissimo così...
usa pure sempre il tuo sample buffer sempre diverso ed il tuo loading buffer semre lo stesso...

non è necessario prepararti il loading diverso...

in generale:
1) tu estrai le tue proteine con il buffer che ritieni + opportuno
2) poi devi preparare i campioni prima di caricarli..se lavori in condizioni denaturanti in genere li scaldi a 95°C giusto? in genere noi il loading lo aggiungiamo a questo livello ed il buffer di lisi è sempre diverso...

tranquillo
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_pietro_
Nuovo Arrivato

Città: Lund


104 Messaggi

Inserito il - 11 ottobre 2010 : 12:39:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di _pietro_ Invia a _pietro_ un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ricevuto.

Ma cosi', per amor di discussione, pensi che loading buffers su misura per ogni buffer di estrazione possano aiutare una migliore riuscita dell'elettroforesi ed eventualmente del blotting o e' un accortezza irrilevante?
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