Ciao a tutti, volevo sapere se qualcuno ha un protocollo di Western Blot raffinato per rilevare il fattore di trascrizione MyoD in cellule satelliti? Io ho riscontrato parecchie difficoltà, in quanto ho rilevato parecchie bande che non so identificare e non una banda netta che mi consente di quantificare la proteina in esame . Grazie in anticipo. Rimango in attesa di un vostro riscontro.
in genere in un western per identificare la tua banda puoi fare 2 cose: 1) basarti sul peso della proteina (ma ce ne possono essere di vicine ok...) 2) usare un controllo negativo, cioè caricare in un pozzetto un lisato di cellule che non esprimono myoD... non so, myoD-/- oppure cellule di cervello (spero che non lo abbiano ehehe). In questo caso la banda che non vedrai in questo pozzetto e che invece comparirà nei tuoi lisati muscolari, sarà la banda di myoD.