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alice83
Nuovo Arrivato
Città: ancona
13 Messaggi |
 Inserito il - 27 ottobre 2010 : 16:35:26
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ciao a tutti! questo è il primo post che scrivo in questo sito.
ho da poco tempo iniziato a lavorare in un laboratorio di genetica ed ora mi ritrova a fare una marea di PCR, i cui protocolli di reazione sono gia pronti. ma in questi giorni devo metere a punto una mix di reazione nuova.......è qui che mi è sorto un dubbio!!!
la concentrazione della Taq polimerasi è espressa in U/ul,ok?
ipotizziamo che la concentrazione della madre sia di 2U/ul mentre a me serve a 1U/ul,cosa faccio? una semplice diluizione con la nota formula C*V=Cf*vf?
ciao e buona lavoro a tutti!
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 27 ottobre 2010 : 17:39:33
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La Taq in genere non si diluisce, è in un tampone apposito che contiene glicerolo e si usa tale e quale.
Tu a che concentrazione finale la devi usare nella mix? In genere se ne usano indicativamente 0,02-0,08U/ul finali nella reazione di PCR.
Se ce l'hai a 2U/ul semplicemente ne utilizzi la metà che useresti se fosse 1U/ul.
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alice83
Nuovo Arrivato
Città: ancona
13 Messaggi |
Inserito il - 28 ottobre 2010 : 15:12:12
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la concentrazione finale che mi è richiesta è di 1.25U/uL.
come faccio? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 28 ottobre 2010 : 23:24:06
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Citazione:
Messaggio inserito da alice83
la concentrazione finale che mi è richiesta è di 1.25U/uL.
come faccio?
Impossibile! Non può essere così tanta è una badilata!!!
Controlla bene! Sarà 1.25U/reazione non può essere 1.25U/uL.
La quantità di Taq da utilizzare per la PCR è quella che ti ho scritto io (controlla pure su tutti i data-sheet della taq esistenti in commercio), poi puoi anche utilizzarne un eccesso ma non di certo di 20-50 volte maggiore.
In una reazione di PCR tipo con un voluime finale di reazione di 50ul, partendo da TAQ 5U/ul (una delle concentrazioni più classiche) ne utilizzi ad es. 0,2-0,5ul che corrispondono a 1-2,5U/reazione quindi 0,02-0.05U/ul. |
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alice83
Nuovo Arrivato
Città: ancona
13 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2010 : 18:44:26
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| grazie! sei stata gentilissima! |
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Taq polomerasi, concentrazione
Didattica
