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CRISTIAN
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92 Messaggi
Inserito il - 21 settembre 2006 : 09:45:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di CRISTIAN Invia a CRISTIAN un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
STO EFFETTUANDO UNA TRASFEZIONE transiente DI UN VETTORE (pcDNA3) in cellule . il vettore č normale, privo di GFP. vorrei sapere come faccio a discriminare le cellule che hanno non hanno "preso" il plasmide: praticamente le cellule che non si sono trasfettate.
Grazie.
Cristian

AleXo
Moderatore

OrniAle

Prov.: Estero
Cittā: San Francisco, California


1550 Messaggi
Inserito il - 21 settembre 2006 : 11:26:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AleXo  Invia a AleXo un messaggio AOL Invia a AleXo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
non hai un marker di selezione?
con questo vettore potresti selezionare le cellule con la Neomycin...no?
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CRISTIAN
Nuovo Arrivato



92 Messaggi
Inserito il - 21 settembre 2006 : 11:39:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di CRISTIAN Invia a CRISTIAN un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
il vettore ha solo la resistenza alla neomicina, ma fra tutte le cellule come faccio a distinguere quelle trasfettate e quelle prive di vettore?
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AleXo
Moderatore

OrniAle

Prov.: Estero
Cittā: San Francisco, California


1550 Messaggi
Inserito il - 21 settembre 2006 : 11:57:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AleXo  Invia a AleXo un messaggio AOL Invia a AleXo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Quelle prive di vettore non crescono (o non dovrebbero) in neomicina!
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CRISTIAN
Nuovo Arrivato



92 Messaggi
Inserito il - 21 settembre 2006 : 16:21:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di CRISTIAN Invia a CRISTIAN un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ma nella transiente non si usa la neo!
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AleXo
Moderatore

OrniAle

Prov.: Estero
Cittā: San Francisco, California


1550 Messaggi
Inserito il - 21 settembre 2006 : 16:46:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AleXo  Invia a AleXo un messaggio AOL Invia a AleXo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si vero, ma se non hai nessun altro marker di selezione possibile non vedo altri modi se non sfruttare la resistenza al G418.

non sono un esperto di mammalian cells, magari sbaglio.

cmq cosa ci devi fare poi con le cellule trasfettate? e cosa transfetti?
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CRISTIAN
Nuovo Arrivato



92 Messaggi
Inserito il - 21 settembre 2006 : 18:44:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di CRISTIAN Invia a CRISTIAN un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sono cellule epatiche, sto facendo studi su alcuni geni coinvolti nel tumore epatico
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