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Autore Discussione  

alessandro gori
Nuovo Arrivato



2 Messaggi
Inserito il - 28 novembre 2010 : 09:39:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di alessandro gori Invia a alessandro gori un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho una domanda da fare che forse può sembrare ovvia per molti ma non per me.
Ho un inserto da clonare con i siti di restrizione n-terminale BglII e c-terminale BamHI. Ora il plasmide che devo utilizzare presenta graficamente nel foglio delle istruzioni questi siti ma invertiti cioè prima viene il BamHI e poi il BglII . Ora posso clonare il mio gene così oppure mi troverò il gene invertito e quindi impossibilitato a trascrivere la sequenza?
Ringrazio anticipatamente per la gentile collaborazione.

Patrizio
Moderatore

mago

Città: Barcellona


1912 Messaggi
Inserito il - 28 novembre 2010 : 10:11:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ma perche' non disegni dei primers che ti permettano di clonare nel modo corretto? di trascrivere lo trascrivi... il problema nasce nella traduzione , e poi che te ne fai di un trascritto revertato ?

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SpemannOrganizer
Utente

Spemann

Città: Los Angeles


955 Messaggi
Inserito il - 28 novembre 2010 : 11:57:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpemannOrganizer Invia a SpemannOrganizer un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ti trascriveresti un antisenso...buono per le ibridazioni in situ :). Se hai un promotore anche dall'altra parte che ti possa trascrivere il filamento senso bene, altrimenti scegli altri siti di restrizione come ti ha suggerito Patrizio.
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alessandro gori
Nuovo Arrivato



2 Messaggi
Inserito il - 29 novembre 2010 : 11:38:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di alessandro gori Invia a alessandro gori un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ok era come pensavo. Seguo il vostro consiglio.
Grazie per la collaborazione. ALe
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RM
Nuovo Arrivato



115 Messaggi
Inserito il - 29 novembre 2010 : 11:44:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di RM Invia a RM un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Volendo potresti farlo. Se non ricordo male Bgl2 e bamh1 hanno estremità compatibili. Tenendo presente che così però non sarà più un clonaggio direzionale
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SpemannOrganizer
Utente

Spemann

Città: Los Angeles


955 Messaggi
Inserito il - 29 novembre 2010 : 13:11:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpemannOrganizer Invia a SpemannOrganizer un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non mi pare che BglII e BamHI abbiano estremità compatibili.
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RM
Nuovo Arrivato



115 Messaggi
Inserito il - 29 novembre 2010 : 14:08:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di RM Invia a RM un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
A me sembra di sì:

BamH1:
G / G A T C C
C C T A G / G

5´ - GATC
BglII:

A / G A T C T
T C T A G / A

5´ - GATC
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SpemannOrganizer
Utente

Spemann

Città: Los Angeles


955 Messaggi
Inserito il - 29 novembre 2010 : 14:23:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpemannOrganizer Invia a SpemannOrganizer un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
hai ragione! sono isocaudomeri. Pardon
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