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Daria85
Utente
678 Messaggi |
 Inserito il - 03 dicembre 2010 : 10:27:34
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ciao a tutti!
nel mio lab sta succedendo una cosa strana...
io e una mia collega stiamo facendo dei WB sulle stesse proteine in linee cell diverse, utilizzando però entrambe gli stessi reagenti:gel, membrana, buffer vari e soprattutto stessi IG 1ari e 2ari,oltre allo stesso sistema di rivelazione.
da un po' di tempo xò, le lastre delle mia collega restano praticam immacolate,ossia da delle belle bande che si vedevano, ora o non si vedono affatto, o si vedono ma solo dopo 1h di esposizione( e cmq sono flebilissime). al contrario,ai miei WB questo non succede e procede tutto normalmente.
volevo chiedere quindi pareri al riguardo...
secondo voi il problema sta nel campione o nel sistema di rivelazione\Ig 2ario????
grazie
Daria
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_pietro_
Nuovo Arrivato
Città: Lund
104 Messaggi |
Inserito il - 03 dicembre 2010 : 11:58:14
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| Usate le stesse macchine? Elettroforesi, blotting e power supplier? |
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kristanko
Utente Junior
Città: Bologna
123 Messaggi |
Inserito il - 03 dicembre 2010 : 12:21:57
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| usate lo stesso ECL? |
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 03 dicembre 2010 : 13:05:39
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| tutto esattamente uguale! |
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_pietro_
Nuovo Arrivato
Città: Lund
104 Messaggi |
Inserito il - 03 dicembre 2010 : 13:33:27
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Stai dicendo che in principio avevate entrambe buoni risultati ed ora non piu'? Usate l'anticorpo dallo stesso vial? Avete provato anche con altri anticorpi primari e secondari?
Anche se la mia sensazione e' che sia qualcosa di stupidissimo e che ci sfugga un particolare |
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 03 dicembre 2010 : 14:46:11
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sisi lei nn vede pratic + nulla, io invece ho risult normali...
usiamo tutto uguale, dalle stesse vial ecc...TUTTO!
lei sostiene sia un problema di 2ario, x me si sn scassati i campioni suoi...mah... |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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alessandro.p
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 03 dicembre 2010 : 15:03:49
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| Secondo me è un problema di campioni. Falle fare un western coi tuoi campioni. Se appare la banda è un problema di campioni, se no, è un problema dell'operatore... |
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_pietro_
Nuovo Arrivato
Città: Lund
104 Messaggi |
Inserito il - 03 dicembre 2010 : 16:13:25
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| Concordo assolutamente con Chick e Alessandro p... bisogna che invertiate certi fattori .. se usate le stesse cose, ma cellule diverse, quello pare sia l'unica variabile... |
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 03 dicembre 2010 : 18:27:51
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grazie mille dei consigli!
credo ke semplicemente ripreparerà i campioni, xkè all'inizio le eran venuti bei WB!
ke si trattasse dei campioni era stata la mia prima idea...poi oggi,dopo svariato tempo,pure io nn ho avuto ottime bande...forse è dovuto al fatto che conserviamo i lisati a -20°C e nn a -80°C...
ciao a tutti e baciiiiiiii |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 03 dicembre 2010 : 22:51:20
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| quante volte songelati e ricongelati? |
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 04 dicembre 2010 : 10:55:44
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| almeno 5-6 volte...:( |
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Discussione |
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bande fantasma WB
Didattica e Relazioni
